蛋白质的共价结构0.pptxVIP

蛋白质的共价结构0;第4章 蛋白质的共价结构Chapter 4. The covalent structure of protein;一、蛋白质通论;根据分子形状分类;简单蛋白质分类;;(二）蛋白质分子的形状和大小：;蛋白质相对分子量变化很大，一般在6000-1×106;(三) 蛋白质结构和功能的多样性 蛋白质序列的多样性决定了其功能的多样性。 如：20种氨基酸形成的二十肽（每种氨基酸只用1次）可以形成的异构体为： 20！= 2 ×1018 又如：相对分子质量为34000的蛋白质含12种氨基酸，假定在肽链的任一位置， 12种氨基酸出现的概率相等，则34000/120 = 283 12283 = 10305;1.催化：大多数酶是蛋白质。 ;二、肽;第12页/共43页;最简单的肽为二肽（dipeptide),含一个肽键； 一般把不多于12个残基的肽叫二肽、三肽……十二肽； 不多于20个残基的肽叫寡肽(oligoteptide) 多于20个残基的肽叫多肽； 氨基酸残基（amino acid residue). ;共振产生的重要结果：? 限制绕肽键的自由旋转 ? 形成酰胺平面或肽（基）平面（amide/peptide plane） ? 产生键的平均化(键长：1.33 nm， 介于1.25-1.45 nm之间) ? 肽键呈反式构型;（二）肽的物理和化学性质;肽游离的a-氨基、a-羧基、R基团的化学反应与氨基酸类似； 双缩脲反应：（双缩脲相似于三肽，即2个肽键），与碱性硫酸铜溶液反应，生成紫红色化合物。 凡大于三肽的肽都能发生此反应，2肽不行。;（三）天然存在的活性肽; 谷胱甘肽在体内参与氧化还原过程，作为某些氧化还原酶的辅因子，或保护巯基酶，或防止过氧化物积累。;第19页/共43页;基本策略： 片段重叠法＋氨基酸顺序直测法 基本步骤： (1) 测定蛋白质分子中多肽链数目； (2)拆分蛋白质的多肽链，断开多肽链内二硫键； (3)分析每一条多肽链的氨基酸组成； (4)鉴定多肽链N－末端、C－末端氨基酸残基； (5)裂解多肽链成较小的片段； (6)测定各肽段的氨基酸顺序； (7)片段重叠法重建完整多肽链一级结构?? (8)确定半胱氨酸残基间形成二硫键交联桥的位置。;将肽段顺序进行叠联以确定完整的顺序;N端： Sanger法（二硝基氟苯反应） DNS法（丹磺酰氯反应） Edman法（苯异硫氰酸脂反应） 氨肽酶法 C端： 肼解法 还原法 羧肽酶法 ;Sanger法;丹磺酰氯法;Edman化学降解法;3.转化反应;ABI protein sequencer;氨肽酶法;C- 末 端 氨 基 酸 的 测 定;C- 末 端 氨 基 酸 的 测 定;二硫键的断裂 ;氨基酸组分的分析;氨基酸的薄层层析分析;;化学裂解;质谱法测定多肽氨基酸的序列;第37页/共43页;第38页/共43页;MALDI-TOF-MS;片段重叠法确定肽段在多肽链中顺序示意;借助重叠肽确定肽段次序：;Brown Hartly Diagonal Electrophoresis;感谢您的欣赏