大肠埃希菌的检测.docxVIP

幻灯片 1 大肠埃希菌的检测 错误！未找到引用源。幻灯片 7 甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培养基 胨 10.0g 硫酸锰 0.5mg 硫酸锌 0.5mg 硫酸镁 0.1g 氯化钠 5.0g 氯化钙 50.0mg 磷酸二氢钾 0.9g 磷酸氢二钠 6.2g 亚硫酸钠 40.0mg 去氧胆酸钠 1.0g MUG 75mg 水 1000mL 除 MUG 外，取上述成分，混合。微温溶解，调节PH7.2-7.4，加入MUG，溶解，每管分装 5mL，灭菌。 幻灯片 8 实验步骤： 取供试供试液 1mL，直接或处理后接种在制好的100mL 胆盐乳糖培养基中,在 37℃ 恒温箱中培养 18～24 h，进行增菌培养。 取上述培养物 0.2mL,接种至含 5mL MUG 培养基的试管内培养，于 5 小时，24 小时在 366nm 紫外灯光下观察，同时用未接种的MUG 培养基做本底对照。 若管内培养物呈现荧光，为MUG 阳性，不呈现荧光，则为MUG 阴性。幻灯片 9 观察后，沿着培养管的管壁加入数滴靛基质试液，叶面呈玫瑰红色，为靛基质阳性， 呈试剂本色，为靛基质阴性。 本底对照应为MUG 阴性和靛基质阴性。 靛基质实验原理 某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。 ? 幻灯片 10 伊红美蓝培养基（EMB 培养基） ? 蛋白胨水琼脂培养基 100ml，20%乳糖溶液 2ml，2%伊红水溶液 2ml，0.5%美蓝水溶液 1ml，将已灭菌的蛋白胨水琼脂培养基（pH7.6）加热溶化，冷却至 60℃左右时，再把已灭菌的乳糖溶液，伊红水溶液及美蓝溶液按上述量以无菌操作加入。摇匀后，立即倒平板。乳糖在高温灭菌易被破坏必须严格控制灭菌温度，115℃灭菌 20min。 幻灯片 11 结果分析： 1.MUG、靛基质结果判断 MUG 培养结果：在 366nm 紫外线下观察 靛基质结果：液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试液本色，为靛基质阴性 MUG 阳性、靛基质阳性，判检出大肠杆菌； MUG 阴性、靛基质阴性，判未检出大肠杆菌； MUG 阳性、靛基质阴性或MUG 阴性、靛基质阳性，需进一步做以下检查 ? 幻灯片 12 2。EMB 培养结果判断 EMB 培养 18-24h 后，检查有无疑似大肠埃希菌菌落（大肠埃希菌落形态特征见表），若无，判供试品未检出大肠埃希菌；若有，进一步做以下试验大肠埃希菌落形态特征 培养基EMB 培养基 EMB 菌落形态 呈紫黑色、浅紫色、篮紫色或粉红色，菌落中心呈深紫色或无明显暗色中心，圆形，微突起，边缘整齐，表面光滑，湿润，常有金属光泽。 幻灯片 13 检验依据： 2010 年版?中国药典?二部附录ⅪJ 微生物限度检查法检验标准规定：口服制剂细菌数 1g 不得超过 1000 个；1ml 不得超过 100 个。霉菌及酵母菌数 1g 不得超过100 个。控制菌 1g（1ml）不得检出大肠埃希菌。 幻灯片 14 注意事项 1．实训过程要严格无菌操作。 2．供试液稀释及注入培养皿时应摇匀再取，供试液从制备至加入培养基不得超过1h. 3．配制MUG 培养基时，务必调pH，否则pH 偏高，MUG 分解，本身则显荧光。 4.培养时间：供试品培养液接种于MUG 培养基中的培养时间，一般在 4h、24h 观察是否产生荧光，如荧光很微弱，不能准确判断时，该延长培养至48h 再观察结果。 幻灯片 15 谢谢观看！！