病理切片技术.pptxVIP

病理切片技术 病理组织制片技术 定义 要实现对病变组织的显微镜形态检查，需要将获得的病变组织制片。我们将切片制作所采取的一系列技术。 一、取材 定义 按照病理检查的目的和要求，切取适当大小和数量的组织块，用于制作组织切片的过程。 二、固定 定义 将组织浸入某些化学试剂。使组织细胞内含物质尽量保持在生活状态时形态结构和位置的过程。 固定 目的1、防止自溶和腐败2、凝固或沉淀细胞内物质3、硬化组织4、增加组织的折光率 常用固定液 特性1、渗透力强，能迅速渗入组织内部 2、不会使组织过度收缩或膨胀3、能硬化、固定组织，使细胞成分的形态和位置与生活状态时相似。4、使组织对染料产生较强的亲和力，并产生较佳的折光率。 固定的注意事项1、及时固定2、固定容器宜大3、防止组织变形 4、确定恰当的固定时间 三、洗涤、脱水、透明 洗涤 用水或乙醇等组织经过固定处理后，未与组织结合的固定液及沉淀物清洗掉的过程。 脱水标本经过固定和冲洗后，组织中含有较多的水分，必须将组织块内的水分置换出来，这一过程。 透明 定义用某些化学试剂将组织中的脱水剂置换出来，以利于浸蜡和包埋，因组织块浸入这此试剂后常呈半透明状。 四、浸蜡、包埋 浸蜡 定义经过透明的组织块在熔化的石蜡中浸蜡，使组织中的透明剂被完全置换出来的过程。 浸蜡的 目的使石蜡浸入组织中，取代组织中含有的透明剂。 包埋 定义将浸蜡后的组织置于融化的固体石蜡中，石蜡凝固后，组织即被包在其中称蜡块，此过程称为包埋。 五、切片 常用的切片方法1、石蜡切片2、冰冻切片3、火棉胶切片 切片制作过程 1、将切片刀安装于刀架上 2、将蜡块固定在切片组织块夹具上 3、调整组织块夹具的调节蜡旋，使蜡块切面与刀口平行 4、先粗修（30-50um） 5、细修（10um） 切片的注意事项1、切片前蜡块要冷冻，但不能把刚包埋好的热蜡块冷冻，否则蜡块会产生裂缝，一夹就碎。 2、蜡块装机时，应注意组织包埋的方向，组织的层次、纤维、肌肉等走向应与切片平行。3、蜡块在切片机固定加紧后要修块，组织块上下留边各2mm 4、蜡块厚度一般在3-5um5、同一把切片刀每次要固定角度 6、切片有纵纹，可能与切片刀有小缺口或修块时未把杂物去除，以及石蜡不洁有关 六、展片 展片 定义 连续转动旋转轮，切片的蜡片相连成状，需要将其展平整才能贴在载玻片上，此过程为展片。 七、贴片、考片 贴片、烘片 待切片在恒温水面上充分展平后，将蜡片捞到载玻片的中段处倾去载玻片上的余水，置入60-65°C恒温箱内或切片漂烘温控仪的烘箱内烤片15-30分钟，脱去熔化组织间隙的石蜡。 八、染色 染色 定义 用染液对组织切片进行处理，使组织中的不同成分被染上相应的染色，产生不同的折射率，以利于显微镜观察和分析的方法。 切片脱水透明要彻底 HE染色后，要彻底脱水透明，才能进行树胶封盖，成为永久标本。如果脱水透明不彻底，封片后呈白色雾状，镜下模糊不清，过一段时间染片就褪色。脱水要经过多次无水乙醇，也可使用石炭酸二甲苯进行脱水，如采用后者，染片要经过多次二甲苯以除去石炭酸。 注意 切片在染色前必须脱蜡干净，未完全脱蜡的组织切片，染色后组织和细胞模糊不清，脱蜡要用两级或三级脱蜡剂如二甲苯，时间为10-20分钟，应视所用二甲苯的新旧以及室温情况而定，脱蜡时间宁为长些，不应过短。 一张高质量的HE切片要求 1、切片完整、贴片恰当 2、切片较薄而均匀