白血病淋巴瘤免疫分型.pptxVIP

白血病淋巴瘤免疫分型第1页/共104页 2流式细胞术的基本概念流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性的技术，同时可以对特定群体加以分选研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量第2页/共104页 3散射光信号和荧光信号前向角散射光（FSC, Forward Scatter） 入射激光的前向散射光信号 细胞相对大小及其表面积侧向角散射光（SSC, Side Scatter） 入射激光90?角的散射光信号 细胞粒度及细胞内相对复杂性荧光素与特异抗体结合，荧光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光信号越强。第3页/共104页 4CD45/SS示意图第4页/共104页 5实验对照的设计空白对照：ALL阴性对照：常用同型抗体对照 单色分析：设同型抗体对照 多色分析：同型对照，单阳性对照（用于仪器校正）阳性对照：检测阴性时第5页/共104页 6空白对照和阴性对照的比较：第6页/共104页 7CD3CD8需要用多少的标志来确证感兴趣的细胞群?它们在细胞上的分布是不是很近?它们是否在不同的细胞上表达不同?他们表达强还是弱?抗原表达CD3CD4CD3CD8第7页/共104页 8抗原分布表面,胞浆,核内是共同检测还是分别检测?表面胞浆核内CD3, CD4, CD8, tetramercytokinesDNACD3,4,8, tetramer+CytokinesCD3,4,8, tetramer+DNACytokines+DNACD3,4,8, tetramer+Cytokines+DNA第8页/共104页 9设门08-03307第9页/共104页 10设门全部 细胞门内细胞08-03307第10页/共104页 11第11页/共104页 12第12页/共104页 13血液肿瘤分类进程第13页/共104页 14目前最完善的血液肿瘤免疫分型文献第14页/共104页 15白血病免疫分型的理论基础 白血病/淋巴瘤免疫分型采用的抗原标志是表达于正常造血细胞不同分化发育阶段的分化抗原。虽然是恶性肿瘤细胞，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病/淋巴瘤进行免疫分型。为了正确分析白血病/淋巴瘤细胞，必须对正常造血细胞分化抗原的表达模式有充分的了解。只有熟悉正常细胞的抗原表达模式，才能辨认白血病/淋巴瘤细胞的存在。 第15页/共104页 16细胞类型鉴定Borowitz et al (1993) AJCP 100:534-40.Steltzer et al (1993) Ann NY Acad Sci 667:265-280第16页/共104页 17CD45/SS示意图正常骨髓细胞 血液肿瘤细胞老化粒细胞 、噬酸细胞 早幼—成熟粒细胞 M3、CML单核细胞 M4、M5 LGL淋巴细胞 CLL、ALL、CLD正常前体细胞 M0、M1、M2、 嗜碱性粒细胞 M4、M5、ALL成熟红细胞、血小板 M6、M7、MM细胞碎片 Pre-B-ALL 非血液来源细胞第17页/共104页 18B淋巴细胞分化与抗原表达关系图Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine第18页/共104页 19T淋巴细胞分化与抗原表达关系图Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine第19页/共104页 20粒细胞分化与抗原表达关系图Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine第20页/共104页 21单核细胞分化与抗原表达关系图Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine第21页/共104页 22非肿瘤T淋巴细胞表型第22页/共104页 23非肿瘤B淋巴细胞表型第23页/共104