基因工程制药新版5.pptxVIP

基因工程制药新版5第1页/共45页第2页/共45页六、基因工程菌的稳定性及生长代谢的特点（一）基因工程菌质粒的不稳定性（二）质粒稳定性的分析方法（三）质粒不稳定的原因（四）提高质粒稳定性的方法（五）基因工程菌的生长速率（六）蛋白质产量/菌体数量比（七）能量供应与菌体生长的关系（八）小分子前体、催化剂供应与菌体生长的关系第3页/共45页（一）基因工程菌质粒的不稳定性基因工程菌在传代过程中常出现质粒不稳定的现象，有分裂不稳定和结构不稳定。 由于质粒不稳定导致的质粒丢失菌与含有质粒的菌之间生产速率不一致导致可能的生长优势，进而能在培养基中逐渐取代含质粒菌成为优势菌群，从而减少基因表达的产率，导致基因工程菌在生产过程中出现不稳定现象。 第4页/共45页（二）质粒稳定性的分析方法（1）将工程菌培养液样品适当稀释，均匀涂于不含抗生素标记的平板培养基，培养10-12h，统计所长出的菌落数A；（2）然后随机挑选100个菌落，接种到含有抗生素标记的平板培养基，培养10-12h，统计所长出的菌落数B；（3）计算B/A的比值。该比值能反映质粒的稳定性,称为稳定性(stability,ST) 第5页/共45页（三）质粒不稳定的原因1、分裂不稳定:指基因工程菌在分裂的子代菌体中，出现一定比例不含质粒的现象。它主要与2个因素有关：（1）工程菌产生丢失质粒的概率，拷贝量低的工程细菌，它所产生不含质粒的细菌变异株