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实验十五 邻二氮菲吸光光度法测定铁 一、实验目的 .掌握光度法测定铁的原理及方法 .学会722分光光度计的正确使用。 .学习如何选择吸光光度分析的实验条件。 二、实验原理 邻二氮菲(phen)是测定微量铁的较好试剂。在pH = 2?9的溶液中，试剂与Fe?+生成稳 定的红色配合物，其lgK = 21.3,摩尔吸光系数￡ = 1.1X104 mol/L,其反应式如下： Fe2++ 3(phen) === Fe(phen)32+ 红色配合物的最大吸收峰在510nm波长处。当铁为+3价时，可用盐酸羟胺还原， 本方法的选择性很高，相当于含铁量40倍的5声+、Al3\ Ca2\ Mg2\ Zn2\ SiO32-, 20倍 (2产、Mn2\ PO43, 5倍Co2*、0?+等均不干扰测定。 吸光光度法的实验条件，如测量波长、溶液酸度、显色剂用量等，都是通过实验来确定 的。本实验在测定试样中铁含量之前，先做部分条件试验，以便初学者掌握确定实验条件的 方法。条件试验的简单方法是：变动某实验条件，固定其余条件，测得一系列吸光度值，绘 制吸光度-某实验条件的曲线，根据曲线确定某实验条件的适宜值或适宜范围。 三、仪器与试剂 .仪器 722型分光光度计、酸度计、容量瓶(50mL)、吸量管(5mL, 10mL)等。 .试剂 (1)铁标准溶液 准确称取0.176克分析纯硫酸亚铁钱(FeSO4 ? (NH4)2 SO4 - 6H2O)于小烧杯中，加水 溶解，加入6moi/LHC1溶液5mL,定量转移至250mL容量瓶中稀释至刻度，摇匀。所得 溶液每毫升含铁0.100 mg (即100ug/mL)。 0.15%邻二氮菲(又称邻菲咯琳)水溶液： 称取1.5g邻二氮菲，先用5?10mL95%乙醇溶解，再用蒸僧水稀释到1000mL。 10%盐酸羟胺水溶液(新鲜配制)； HAc —NaAc 缓冲溶液(pH=4.6)： 称取136g醋酸钠(CH3coONa?3H2O),加60 mL冰醋酸，加水溶解后，稀释到1000mL。 Imol/LNaOH 溶液 6moi / L NaOH 溶液 四、实验步骤 (一)实验条件的选择 .吸收曲线的制作和测量波长的选择： 用吸量管吸取0。1.0mL铁标准溶液(100 ug/ml),分别注入两个50mL比色管中， 各加入1mL盐酸羟胺溶液，2mL邻二氮菲，5mLNaAc,用水稀释至刻度，摇匀。放置10min 后，用1cm比色皿，以试剂空白(即0.0mL铁标准溶液)为参比溶液，在440?560nm之 间，每隔10nm测一次吸光度，在最大吸收峰附近，每隔5nm测定一次吸光度。在坐标纸 上，以波长入为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制A和入关系的吸收曲线。从吸收曲线上 选择测定Fe的适宜波长，一般选用最大吸收波长入maxo .酸度影响(酸度对显色剂的影响、酸度对被测金属离子状态的影响、酸度对络合物形成 的影响。) 于8只50 mL容量瓶(或比色皿)中，用刻度移液管各加入1.0 mL 100ug/ml的铁标 准溶液，再加入1 mL盐酸羟胺溶液和2mL邻二氮菲溶液，摇匀。然后分别加入NaOH溶 液 0.0 mL、0.2 mL 0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL 2.5 mL 3.0 mL。用蒸储水稀释至 刻度，摇匀。放置10 min后分别测定各溶液的pH值和吸光度。吸光度测定条件为：1cm 比色皿，蒸t留水作参比，测定波长为入max。 本实验选择pH=4-6, 一般选为5,可以直接用醋酸钠缓冲溶液调节pH=5,不进行这步 测定。 .显色剂用量的影响 取7个50 mL容量瓶（或比色皿），依次加入1.0 mL 100ug/ml的铁标准溶液，1mL盐 酸羟胺溶液摇匀。再分别力口入邻二氮菲溶液0.1 mL、0.3 mL、0.5 mL、0.8 mL、L0 mL、2.0 mL、4.0 mL和5.0ml的Na Ac,用蒸储水稀释至刻度，摇匀。放置10 min后测定各溶液的 吸光度。 吸光度测定条件为：1cm比色皿，以蒸储水作参比，测定波长为人max。 （二）铁含量的测定 .标准曲线的制作： 用移液管吸取100 Pg - mL铁标准溶液10mL于100mL容量瓶中，加入2mL6moi -L1 的HC1,用水稀释至刻度，摇匀。此溶液每毫升含Fe3+10ug。 在6个50mL容量瓶（或 比色管）中,用吸量管分别加入0Q 2.0,4。6.0,8.0, 10.0mL 10 ug?mL」铁标准溶液，分别 加入1mL盐酸羟胺，2mL Phen, 5mL NaAc溶液，每加一种试剂后摇匀。然后，用水稀释 至刻度，摇匀后放置10min。用1cm比色皿，以试剂为空白（即0.0mL铁标准溶液），在所 选择的波长下，测量各溶液的吸光度。以含铁量为横坐标，吸光度A为纵坐标