物质的能量转换线粒体详解演示文稿.pptVIP

当前第63页\共有94页\编于星期四\18点 当前第64页\共有94页\编于星期四\18点 The ATP synthase is a reversible coupling device 当前第65页\共有94页\编于星期四\18点 支持构象耦联假说的实验有： 1．日本的吉田（Massasuke Yoshida）等人将α3β3γ固定在玻片上，在γ亚基的顶端连接荧光标记的肌动蛋白纤维，在含有ATP的溶液中温育时，在显微镜下可观察到γ亚基带动肌动蛋白纤维旋转。 2．在另外一个实验中，将荧光标记的肌动蛋白连接到ATP合酶的F0亚基上，在ATP存在时同样可以观察到肌动蛋白的旋转。 当前第66页\共有94页\编于星期四\18点 γ亚基旋转的观察 当前第67页\共有94页\编于星期四\18点 （四）氧化磷酸化抑制剂 电子传递抑制剂可用来研究呼吸链各组分的排列顺序，当呼吸链某一特定部位被抑制，底物一侧均为还原态，另一侧均为氧化态，可用分光光度计检测，各组分氧化态和还原态具不同的吸收峰。 1. 电子传递抑制剂: 包括以下类型： ①抑制NADH→CoQ电子传递:阿米妥、鱼藤酮、杀粉蝶素A。 ②抑制Cyt b→Cyt c1电子传递:抗霉素A ③抑制细胞色素氧化酶→O2: CO，CN，NaN3，H2S 当前第68页\共有94页\编于星期四\18点 2．磷酸化抑制剂: 与F0结合结合，阻断H+通道，从而抑制ATP合成：寡霉素、二环己基碳化二亚胺(DCC) 3．解偶联剂(uncoupler): 使氧化和磷酸化脱偶联，氧化仍可进行，而磷酸化不能进行。解偶联剂为离子载体或通道，能增大内膜对H+通透性，消除H+梯度，无ATP生成，使氧化释放出的能量全部以热的形式散发 动物棕色脂肪组织和肌肉线粒体中有独特的解偶联蛋白，与维持体温有关。 当前第69页\共有94页\编于星期四\18点 常用解偶联剂主要有： 质子载体：2，4-二硝基酚(DNP)，羰基-氰-对-三氟甲氧基苯肼(FCCP)。 质子通道: 增温素。 其它离子载体：缬氨霉素。 某些药物：如过量的阿斯匹林也使氧化磷酸化部分解偶联，从而使体温升高。 当前第70页\共有94页\编于星期四\18点 三、线粒体的半自主性 63年发现线粒体DNA(mtDNA)后，又在线粒体发现RNA、DNA聚合酶、RNA聚合酶、tRNA、核糖体等进行DNA复制、转录和蛋白质翻译的全套装备，说明线粒体具独立遗传体系。 线粒体能合成蛋白质，但合成能力有限。线粒体1000多种蛋白质中，自身合成的仅十余种。线粒体核糖体蛋白、氨酰tRNA 合成酶、许多结构蛋白， 都是核基因编码， 在胞质中合成，定向转运到线粒体，故称线粒体为半自主细胞器。 当前第71页\共有94页\编于星期四\18点 利用标记氨基酸培养细胞，用氯霉素和放线菌酮分别抑制线粒体和胞质蛋白质合成，发现人的mtDNA编码的多肽为细胞色素c氧化酶的3个亚基，F0的2个亚基，NADH脱氢酶的7个亚基和细胞色素b等13条多肽。 mtDNA还合成12S和16SrRNA及22种tRNA。 当前第72页\共有94页\编于星期四\18点 mtDNA分子为环状双链DNA，外环为重链(H)，内环为轻链（L）。 基因排列非常紧凑，大多数基因无内含子序列。 基因组变化较大，动物细胞mtDNA较小，约16.5kb，酵母达80kb。 每个细胞含几百个线粒体，每个线粒体又含多个mtDNA，但mtDNA的总量不到核基因组的1%. 当前第73页\共有94页\编于星期四\18点 多数基因由H链转录，包括2个rRNA，14个tRNA 和12个编码多肽的mRNA。 L链编码另外8个tRNA和一条多肽链。 mtDNA上的基因相互连接， 一些多肽基因相互重叠，几乎所有阅读框都缺少非翻译区域。 很多基因没有完整的终止密码， 仅以T或TA 结尾，mRNA终止信号是在转录后加工加上去 当前第74页\共有94页\编于星期四\18点 Genes in mtDNA encode rRNAs, tRNAs, and some mitochondrial proteins Human mt DNA: 16,569bp 2 rRNAs, 22 tRNAs, 13 polypeptides: NADH reductase. 7 sub. Cty b-c1 complex. 1 cytb