大豆磷脂的提取及分析deflategzip.doc

PAGE/NUMPAGES 实训二 大豆磷脂的提取、剖析及卵磷脂咀嚼片的的制备与查验 大豆磷脂的提取及含量测定 一、试剂与仪器 1、试剂 ⑴ 氯化锌溶液：精准称取氯化锌 6.86g，定容于500ml容量瓶中。 ⑵ 大豆市售 ⑶ 无水乙醇10 瓶 ⑷ 磁力搅拌器 ⑸ 对苯二酚溶液：取对苯二酚 0.5g，加水适当使溶解，加硫酸1滴，加水稀释成100ml。 ⑹ 钼酸铵硫酸试液：取钼酸铵 2.5g，加硫酸15ml，加水使溶解成 100ml，即得。本 液配制后两周即不合用。 ⑺ 亚硫酸钠试液：取无水亚硫酸钠 20g，加水100ml使溶解，即得。本液应临用 新制。⑻ 磷酸二氢钾 ⑼ 浓硫酸 ⑽ 过氧化氢 ⑾ 石油醚、 ⑿ 氯仿、甲醇、冰乙酸 20％硫酸铵 ⒁羧甲基纤维素钠 ⒂硅胶GF254 ⒃载玻片 2、仪器 凯氏烧瓶，恒温水浴锅，滤纸；电热恒温鼓风干燥箱；电热套，天平，分光光度计，刻度比色管，硅胶G板，抽滤装置 二、实验操作 ㈠、大豆磷脂的提取及含量测定 1、5斤大豆用粉碎机粉碎得大豆粉 2、卵磷脂的提取 ⑴称取必定质量的大豆粉末，加入必定体积95%的乙醇，置于不一样温度的水浴锅内，一准时间后拿出，减压过滤。见下表 料液比 提取时间 提取温度 氯化锌 1:20 35 10 1:20 40 15 1:15 40 5 1:15 2 35 15 1:15 45 10 1:10 45 15 1:10 35 5 1:20 2 45 5 1:10 2 40 10 (2) 试验步骤：将溶有卵磷脂的乙醇溶液置于磁力搅拌器下， 一边搅拌一边加入必定量 ZnCl2溶液，持续搅拌20min;拿出，减压过滤，并将滤液置于蒸发皿上蒸干 ;拿出产品进行定 性检测。 ㈡ 磷含量测定 标准溶液的制备：取 105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾约0.13g，精细称定，置100ml量瓶 中，加水溶解并稀释至刻度，精细量取 10ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，每1ml 1 中含磷（P)约为30ug。 样品溶液的制备：取本品约0.15g，精细称定，置凯氏烧瓶中,加硫酸20ml与硝酸50ml， 慢慢加热至溶液呈淡黄色，当心滴加过氧化氢溶液，使溶液退色，持续加热30分钟，冷却后， 转移至100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。 测定方法：精细量取比较品溶液与样品溶液各2ml，分别置50ml量瓶中,各挨次加入钼酸 铵硫酸试液4ml，亚硫酸钠试液2ml与新鲜配制的对苯二酚溶液2ml，加水稀释至刻度，摇匀, 暗处搁置40分钟，照可见-紫外分光光度法,在620nm的波优点罚别测定吸光度，计算含磷量。 硅胶薄层板的制备 【实验资料】 1．器械 玻板（5cm×20cm或10cm×20cm，厚度5mm）、直径10cm乳钵、烘箱、干燥器。 2．试剂与试药 硅胶G，羧甲基纤维素钠。 3．%羧甲基纤维素钠的配制：取4g羧甲基纤维素钠加纯净水使成1000ml，室温浸泡过 夜，煮沸使其溶解，补足溶剂减少许，即得。 4、药棉 5、漏斗 6、烧杯 7、拉板器（药匙） 【实验方法】 1、临用前将，0．4%羧甲基纤维素钠先用棉花过滤，以除掉此中的积淀不溶物(不然铺板有麻点)。 2、按硅胶%羧甲基纤维素钠溶液（1：）的比率配好研磨均匀，注意不要有气泡，研磨时 向一个方向研磨，而后用机械搅拌一段时间除掉里面的气泡，再静置半小时就能够铺板了。 3、铺板：将研磨均匀的硅胶倾倒于铺板器内，匀速拉过玻璃板。铺板时，拉铺板器的 速度不要过快，也不要太慢。（或许将载玻片置于平台上，用药匙舀取糊状硅胶，均匀地铺 在载玻片表面。铺板时，能够顺着板中间倒，也能够顺着某个边沿倒，也能够用玻璃棒引着 溶液平铺在玻璃板上，倒时也要注意不要引入吝啬泡。若有需要，能够双手10个指头托住 玻璃板，有节奏的颠簸，使得糊状硅胶散布均匀。） 4、涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干后，在120℃烘30分钟（105℃烘120 分钟），拿出，置干燥器中储存，临用时拿出。 卵磷脂薄层色谱实验 【实验资料】 1．器械 10ml量筒、层析缸（大小与所所铺的薄层板相当）、点样毛细管、硅胶G薄层板、显色 喷雾瓶、台称、水浴锅、烘箱。 2．试剂与试药 氯仿、甲醇、冰乙酸、甲醇、95%乙醇、硫酸等。 3．10%硫酸乙醇溶液的配制：用量筒量取硫酸10ml，迟缓加至100ml95%乙醇中，摇匀， 放冷，即得。 【实验方法】 1．硅胶薄层板划线； 2、取磷脂样品50mg，加入2～3滴石油醚使之溶解， 3、照薄层色谱法，用毛细管汲取上述溶液于硅胶G薄层板上；以在氯仿：甲醇：乙酸： 水(85：15：10：3，V/V)为睁开剂，睁开，拿出，记录睁开剂的前沿地点，晾干，记下展 2 开剂的地点。 4、显色 向干燥的薄板喷洒20％硫酸铵(加入4ml浓硫酸)，直到薄板变得透明