干细胞与组织工程上.pptxVIP

干细胞与组织工程上;第 7 章干细胞与组织工程;什么是干细胞(stem cells);干细胞的分类;胚胎干细胞和成体干细胞的比较;What is a stem cell?;Where can scientists obtain stem cells?;干细胞是研究的热点;2007年欧盟经过长时间的辩论后决定拨款资助人类干细胞研究。而此前，美国总统布什首次动用否决权，驳回胚胎干细胞研究的法案，引起轩然大波。这个事件在科学、 伦理和政治的揪扯下，愈演愈烈，最后终于引发了一场激烈的“文化战争”。 （视频1）;中国人对胚胎干细胞研究的看法比较一致;7.1 胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES细胞）; 受精 卵裂 受精后72h 受精后5-7天 精子+卵子 合子 卵裂球 桑椹胚 囊胚 blastocyst 滋养层?胎盘及胎儿附属结构 囊胚 内胚层?消化道、呼吸道上皮和腺体；肝；胆；胰。 内细胞团 中胚层?结缔组织；血液；肌肉；骨骼；泌尿生殖系统 外胚层?体表结构；神经系统;A blastocyst is…;定　义;胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES细胞） 胚胎生殖细胞（embryonic germ cells, EG细胞）;7.1.1　胚胎干细胞的研究历程;1981年，英国剑桥大学的Martin Evans等首次于用延迟着床的小鼠囊胚建立起未分化的ES细胞系;James A. Thomson在 Wisconsin大学领导一个研究小组从人胚胎组织中培养出了干细胞株。他们使用的方法是：人卵体外受精后，将胚胎培育到囊胚阶段，提取内细胞团，建立细胞株。经测试这些细胞株的细胞表面标志和酶活性，证实它们就是胚胎干细胞。(Science, 1998　(l282):1145-1147);John D. Gearhart在 Johns Hopkins大学领导另一个研究小组也从人胚胎组织中建立了干细胞株。他们的方法是：从受精后5－9周人工流产的胚胎中提取原始生殖细胞( primordial germ cell )。由此培养的细胞株，证实具有多能干细胞的特征。(PNAS, 1998 (l95):13726-13731) ;Scientists James Thomson and John Gearhart joined patient advocate Christopher Reeve to discuss stem cell research ;第21页/共106页;霍金批评欧美人士试图禁止人类胚胎干细胞研究;※ 1999年12月??美国《科学》杂志公布了当年世界科学进展的评定结果，干细胞的研究成果列在举世瞩目耗资巨大的人类基因组工程之前，名列十大科学进展首位。 ※ 2002年3月，美国麻省理工学院的科学家宣布，他们首次利用人体胚胎干细胞培育出毛细血管，证明了胚胎干细胞技术在治疗心血管疾病等领域的应用潜力。 ※ 目前已有报导ES细胞能在适当条件下分化为心肌细胞，胰岛细胞，血管内皮细胞，肝细胞等。;7.1.2　胚胎干细胞的生物学特性;7.1.3　胚胎干细胞的建系;(1)利用干细胞特征分离流式细胞仪分离法;(2)免疫外科学方法去除滋养层细胞;分离方法;２ ES细胞的分化抑制培养;分化抑制物的选择;饲养层细胞 feeders;饲养层细胞要铺满;抑制分化的因子——白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF) ES细胞培养常用含有LIF的培养基（高糖）和饲养层细胞来阻止细胞的分化 ;;建 系;胚胎干细胞建系(flash2);胚胎干细胞集落;第38页/共106页;小结:胚胎干细胞的建系过程;（1）细胞形态特征、取材部位 （2）细胞表面的特殊标志 （3）细胞内干细胞标志基因的表达 （4）端粒酶 （5）核型分析 体内分化 （6）分化潜能 体外分化 嵌合体:小鼠胚胎干细胞已经制备嵌合体;形态学鉴定：典型的ES细胞体积较小，有一个大核，核内有一个或多个明显的核仁，胞质较少。细胞之间界限不清晰，紧密聚集呈鸟巢状克隆。 ;胚胎干细胞克隆;胚胎干细胞的特性;细胞内干细胞标志基因的表达;免疫组织化学染色;