生化核酸的酶促降解及核苷酸代谢.pptxVIP

生化核酸的酶促降解及核苷酸代谢第1页/共55页 第一节 核酸的酶促降解 一、核酸酶二、限制性内切酶 核酸酶 核苷酸酶 核苷酸磷酸化酶 核酸 核苷酸 核苷 碱基+戊糖磷酸第2页/共55页 核 酸 酶1、核酸酶的分类（1）根据对底物的 专一性分为（2）根据切割位点分为核糖核酸酶(RNase)脱氧核糖核酸酶(DNase)非特异性核酸酶核酸内切酶核酸外切酶2、核酸酶的作用特点第3页/共55页 外切核酸酶对核酸的水解位点5′ p p p pOHB p p p p3′BBBBBBB牛脾磷酸二酯酶（ 5′端外切5得3）蛇毒磷酸二酯酶（ 3′端外切3得5）第4页/共55页 内切核酸酶对RNA的水解位点示意图5′ p p p pOHPyPuPyPy1′ p p pGACU p p pGA3′RNAase IRNAase IRNAase T1RNAase T1Pu ：嘌呤 Py：嘧啶 第5页/共55页 限制性内切酶? 类型? 专一性?命名意义 原核生物中存在着一类能识别外源DNA双螺旋中4-8个碱基对所组成的特异的具有二重旋转对称性的回文序列，并在此序列的某位点水解DNA双螺旋链，产生粘性末端或平末端，这类酶称为限制性内切酶（ristriction endonuclease）。第6页/共55页 限制性内切酶类型 I型：分子量大于105，多亚基，需S-线苷蛋氨酸、ATP和Mg2+ ，识别位点与切割位点相差甚远，产物为异质，是限制与修饰相排斥的多功能酶. Ⅱ型：分子量小于105，需Mg2+ ，切割位点位于识别 位点上，产物为专一性片段，不具修饰酶功能。现在分子生物学研究所用的限制性内切酶均为此类。 ⅡI型：识别位点为5-7bp的非对称序列 ，切割位点在顺序之外离识别 序列5-10bp，切割双链，个别也切割单链。是限制与修饰相多功能酶.第7页/共55页 常用的DNA限制性内切酶的专一性酶辨认的序列和切口说明‥ ‥A G C T ‥‥‥ ‥T C G A ‥ ‥‥ ‥G G A T C C ‥‥‥ ‥C C T A G G ‥‥‥ ‥A G A T C T ‥‥‥ ‥T C T A G A ‥‥‥ ‥G A A T T C ‥‥‥ ‥C T T A A G ‥‥‥ ‥A A G C T T‥‥‥ ‥T T C G A A ‥‥‥ ‥G T C G A C ‥‥‥ ‥C A G C T G ‥‥‥ ‥C C C G G G ‥‥‥ ‥G G G C C C ‥‥Bam H IAlu IBgl IEco R IHind ⅢSal ISma I四核苷酸，平端切口六核苷酸，平端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口第8页/共55页 限制性内切酶的命名和意义Eco R I序号属名种名株名例：Eco R I，这是从大肠杆菌（Ecoli）R菌珠中分离出的一种限制性内切酶 限制性内切酶是分析染色体结构、制作DNA限制图谱、进行DNA序列测定和基因分离、基因体外重组等研究中不可缺少的工具，是一把天赐的神刀，用来解剖纤细的DNA分子。第9页/共55页 第二节 核苷酸的分解代谢2、嘧啶的降解1、嘌呤的降解 核苷酸酶 核苷酸磷酸化酶核苷酸 核苷 碱基+（脱氧）戊糖磷酸第10页/共55页 嘌呤的分解第11页/共55页 第12页/共55页 第13页/共55页 嘧啶的分解乙酰CoA 琥珀酰CoA第14页/共55页 第15页/共55页 第16页/共55页 第三节 核苷酸的合成代谢从头合成：利用少数几种氨基酸、核糖-5-磷酸、CO2等作为原料来合成。补救合成途径：利用细胞内已有的游离碱基或核苷进行合成。第17页/共55页 第三节 核苷酸的合成代谢一、核糖核苷酸的生物合成二、脱氧核糖核苷酸的生物合成三、单核苷酸转变成核苷二磷酸和核苷 三磷酸（自学）四、各种核苷酸的相互转变第18页/共55页 一、核糖核苷酸的生物合成1、嘌呤核苷酸的生物合成(1) 从头合成途径(2) 补救途径(自学)2、嘧啶核苷酸的生物合成(1) 从头合成途径(2) 补救合成途径(自学)第19页/共55页 1 、嘌呤核苷酸的从头合成途径c、IMP转变为AMP和GMP a、嘌呤环上原子的来源b、IMP的从头合成第20页/共55页 嘌呤环上各原子的来源天冬氨