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吉林农大生化——蛋白质;（2）与茚三酮反应 茚三酮在弱酸中与α-氨基酸共热，引起氨基酸的氧化脱氨，脱羧反应，最后，茚三酮与反应产物－氨和还原茚三酮反应，生成紫色物质（λmax=570nm）。由于此吸收峰值与氨基酸的含量存在正比关系，因此可作为氨基酸定量分析方法。Pro、Hy-Pro与茚三酮反应直接形成黄色化合物（ λmax=440nm）;第3页/共82页;（3）桑格（Sanger) 反应?：2.4一二硝基氟苯（DNFB） α－氨基酸＋DNFB→DNP氨基酸 黄色，层析法鉴定, 用于测定多肽的N-末端氨基酸 ;OH－;第三节???? 蛋白质的分子结构 Molecular Structure of Protein;一、? 蛋白质结构的层次;一级结构;+; 肽（peptide）：一个氨基酸的?-羧基和另一个 氨基酸的?-氨基脱水缩合而成的化合物。 肽键（peptide bond）：氨基酸间脱水后形成的 共价键称肽键（酰胺键）。 肽是由氨基酸通过肽键缩合而形成的化合物。 ;; B.中文名称：丝氨酰甘氨酰酪氨酰丙氨酰亮氨酸 C.三字母写法： Ser-Gly--Tyr-AlaLeu或 D .单字母写法：ＳＧＹＡＬ;N末端;3、? 天然存在的活性肽 （1）?? 谷胱甘肽(glutathione, GSH) Glu—Cys—Gly红细胞中的巯基缓冲剂。参与氧化还原过程，清除内源性过氧化物和自由基，维护蛋白质活性中心的巯基处于还原状态。 ;（2）?? 短杆菌肽（抗生素）和缬氨霉素 短杆菌肽是由短杆菌产生的10肽环。抗革兰氏阳性细菌，临床用于治疗化脓性病症。 ? L-Orn—L-Leu—D-Phe—L-Pro—L-Val—L-Orn—L-Leu—D-Phe —L-Pro—L-Val (3)?? 脑啡肽（5肽） Met 脑啡肽： Tyr—Gly—Gly—Phe—Met 具有镇痛作用。 ;三、蛋白质一级结构 （一）蛋白质一级结构的定义及表示法 一级结构（又称化学结构或共价结构）： 是指蛋白质分子中氨基酸残基的排列顺序，包括二硫键的位置和数目。 ;（二）蛋白质测序的一般步骤 （1）??? 测定蛋白质分子中多肽链的数目 （2）??? 拆分蛋白质分子中的多肽链。 （3）?? ?断裂链内二硫键。 （4） 分析多肽链的N末端和C末端。 （5）??? 测定多肽链的氨基酸组成。 （6）??? 多肽链部分裂解成肽段。 （7）??? 测定各个肽段的氨基酸顺序 （8）??? 确???肽段在多肽链中的顺序。 （9）??? 确定多肽链中二硫键的位置。;第18页/共82页;（三） 测序前的准备工作 1、?? 蛋白质的纯度鉴定 纯度97%以上，均一。 ⑴聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)要求一条带 ⑵DNS-Cl（二甲氨基萘磺酰氯）法测N端氨基酸 2、测定分子量，估算氨基酸残基数，确定肽链数 SDS 凝胶过滤法 沉降系数法;四、蛋白质的二级结构;构型 在一个化合物分子中，原子的空间排列，这种排 列的改变，会涉及到共价键的生成与破坏，但与 氢键无关。 构象 多肽链中的一切原子，由于单键的旋转而产生不 同的空间排布，这种空间排布的改变，仅涉及到 氢键等次级键的生成与破坏，但不涉及共价键的 生成与断裂。;（二）?? 肽单位（肽单元）与二面角;肽单元;两面角（dihedral angle） 在多肽链里，Cα碳原子刚好位于互相连接的两个肽平面的交线上。Cα碳原子上的Cα-N和Cα-C都是单键，可以绕键轴旋转，其中以Cα-N旋转的角度称为ф，而以Cα-C旋转的角度称为ψ，这就是α-碳原子上的一对二面角。 ;★当Φ(Ψ)旋转键两侧的主链呈顺式时，规定Φ(Ψ) =0° ★从Cα沿键轴方向看，顺时针旋转的Φ (Ψ)角为正值，反之为负值。 Φ和Ψ同时为0的构象实际不存在 二面角（Φ、Ψ）所决定的构象能否存在，主要取决于两个相邻肽单位中非键合原子间的接近有无阻碍。 Cα上的R基的大小与带电性影响Φ和Ψ。;（三）? 二级结构的基本类型 1、 α螺旋 （1） α螺旋的一般特征（内容）： ①多肽链主链骨架围绕一个中心轴盘绕，形成右手螺旋手。每一螺旋圈包含3.6个a.a残基，每圈螺距0.54nm，每个aa残基沿轴上升0.15nm,绕轴旋转100°。 ;②相邻的螺圈之间形成链内氢键。氢键的方向与α螺旋的方向几乎平行。 ③ 与a-碳原子相连的R侧链，位于a螺旋的外侧，对α螺旋的形成和稳定有较大的影响。 ; R侧链对α-螺旋的影响 ① 多肽链上连续出现带同种电荷基团的氨基酸残基,(如L