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鲍曼不动杆菌携带-内酰胺酶基因的检测 宝曼病（ab）是引起医院感染的重要病原体之一。 1 材料和方法 1.1 菌株鉴定及药敏试验 收集2013年9月—2015年6月佳木斯大学附属第一医院住院患者临床分离的鲍曼不动杆菌共110株, 除去重复样本, 应用Vitek II Compact及walkway-40进行菌种鉴定并进行体外药物敏感性分析。 1.2 引用和设计 引物设计参考相关文献 1.3 pcr扩增系和聚合酶系 煮沸法制备DNA模板, -20℃贮存。优化实验条件, 建立多重PCR检测OXA酶基因 (blaOXA-23-like, blaOXA-24-like, blaOXA-51-like, blaOXA-58-like) , 总体积为25μL, 反应体系:多重PCR Mix 12.5μL, 引物 (10μM) 各0.2μL, 待检DNA模板1μL, 加入GC Enhancer 2μL。条件:95℃2 min; (95℃30 s, 60℃90 s, 72℃60 s) 共35个循环;72℃延伸10 min, 4℃保存。16SrRNA等其他反应体系:5×buffer缓冲液5μL, 10 m M dNTP0.5μL, Tag聚合酶5 U/μL 0.2μL, 上下游引物 (10μM) 各1μL, 2 ng/μL待检DNA模板。条件:94℃5min; (94℃30 s, 58℃40 s,