酶与蛋白质工程第9章固定化酶与固定化细胞.pptVIP

(2) 吸附法 分物理吸附法和离子交换吸附法 ① 物理吸附法 物理吸附法是将微生物细胞附着于固体载体上的一种固定方法。载体常用的多孔砖、瓷杯、木屑、蔗渣、聚氯乙烯、硅藻土、玻璃纤维等 如，将酵母用聚氯乙烯或多孔砖固定化，每克载体可以固定80mg酵母；也可将固定化的酿酒酵母，装入反应柱，以生产乙醇，乙醇可达120g/L。在环境保护中用木片、石砾等固定微生物细胞作为污水处理的过滤器 物理吸附法载体与微生物细胞间不起反应，吸附量大，但细胞极容易脱落而流失 固定化细胞 当前第31页\共有49页\编于星期五\13点 ②离子交换吸附法 利用离子交换吸附细胞常用的载体是离子交换树脂 例如，利用阴离子交换树脂吸附放线菌含葡萄糖异构酶含酶菌株； 用Dowea吸附敏捷固氮菌(含多酶)菌株； 用离子交换纤维素吸附无色杆菌(含头孢霉素酰化酶菌株)； 用离子交换纤维素吸附米曲霉含转化酶菌株等获得成功 这种方法制备的固定化细胞，细胞易脱落，需不断补充新细胞 固定化细胞 当前第32页\共有49页\编于星期五\13点 动植物细胞固定化 植物细胞固定化 植物细胞比菌体细胞娇嫩得多，需要温和的固定化方法。80年代开始研究，目前一般采用包埋法和吸附法 固定化细胞 包埋法 将植物细胞包埋于琼脂、海藻酸钙、聚丙烯酰胺、明胶和角叉菜胶等多孔凝胶中 Brodelius等(1979)首次用海藻酸钙包埋制备了固定化长春花细胞、毛地黄细胞、海巴戟细胞 当前第33页\共有49页\编于星期五\13点 在Ca2+离子等多价阳离子的存在下，海藻酸盐的羧基和阳离子之间形成离子键。因海藻酸钙不溶于水，在细胞表面形成凝胶 如果采用磷酸、柠檬酸、EDTA等螯合剂处理将Ca2+离子除去，又能使胶体溶解释放出细胞 当海藻酸钙微囊用多聚赖氨酸处理后，使凝胶微球表面成膜，不会再被螯合剂溶解。再用柠檬酸去除钙离子，球内海藻酸钠成液态，细胞悬浮在微囊内 海藻酸盐—多聚赖氨酸微囊化 固定化细胞 当前第34页\共有49页\编于星期五\13点 植物细胞微囊化示意图 固定化细胞 当前第35页\共有49页\编于星期五\13点 固定化酶(Immobilized Enzyme） 20世纪60年代发展起来的一项新技术 以往使用的酶绝大多数是水溶性酶。这些水溶性酶催化结束后，极难回收，因而阻碍了酶工业的进一步发展 60年代后，在酶学研究领域内涌现出固定化酶。通过物理的或化学的手段，将酶束缚于水不溶的载体上，或将酶束缚在一定的空间内，限制酶分子的自由流动，但能使酶充分发挥催化作用 曾称其为水不溶酶或固相酶。1971年第一届国际酶工程会上正式建议采用固定化酶的名称 从60年代起，固定化酶的研究发展很快，起初人们把注意力集中在酶的固定化方法研究上，近来，不但固定化方法和载体开发有了长足发展，并且已转向它在工业、医药、化学分析、亲和层析、环境保护、能源开发以及理论研究等方面的应用研究 固定化酶 当前第1页\共有49页\编于星期五\13点 固定化酶与水溶性酶比较具有以下优点： (1) 极易将固定化酶与底物、产物分开；产物溶液中没有酶的残留，简化了提纯工艺 (2) 可以在较长时间内反复使用，有利于工艺的连续化、管道化 (3) 酶反应过程可以严格控制，有利于工艺自动化和微电脑化 (4) 在绝大多数情况下提高了酶的稳定性 (5) 较能适应于多酶反应 (6) 酶的使用效率提高，产物得率提高，产品质量有保障，成本低 固定化酶 当前第2页\共有49页\编于星期五\13点 固定化酶也存在一些缺点： (1) 酶固定化时酶的活力有所损失。同时也增加了固定化的成本，使工厂开始投资大 (2) 比较适应水溶性底物和小分子底物 (3) 与完整细胞比较，不适于多酶反应，特别是需要辅因子的反应。同时，对胞内酶需经分离后才能固定化 固定化酶 当前第3页\共有49页\编于星期五\13点 酶的固定化方法 吸附法；共价结合法；交联法；包埋法 固定化酶 当前第4页\共有49页\编于星期五\13点 当前第5页\共有49页\编于星期五\13点 吸附法 吸附法分为物理吸附法和离子交换吸附法 物理吸附法: 通过氢键、疏水作用和π电子亲和力等物理作用，将酶固定于水不溶载体上，制成固定化酶 ①有机载体，纤维素、骨胶原、淀粉等 如，用纤维素作为吸附剂吸附木瓜蛋白酶、碱性磷酸脂酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶。吸附后在载体表面形成单分子层，吸附蛋白能力约70 mg/cm2 ②无机载体，氧化铅、高岭土、多孔硅、多孔玻璃等 如，用多孔硅为载体吸附淀粉酶，在45℃进行