DB37∕T 2121-2012 尿素中多肽含量的测定.docxVIP

ICS?65.080 G?20 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB37/T?2121—2012 尿素中多肽含量的测定 2012-05-07?发布 2012-06-01?实施 山东省质量技术监督局 发?布 DB37/T?2121—2012 前 言 本标准按照GB/T?1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省化工行业标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位：山东省化工研究院、中化山东肥业有限公司。 本标准主要起草人：崔爱红、王瑞菲、李琳、祈新宇、于朋玲、刘丙勇、饶飞、邱娟。 I DB37/T?2121—2012 尿素中多肽含量的测定 1??范围 本标准规定了尿素中多肽含量高效液相色谱测定的试验方法。 本标准适用于尿素中多肽含量的测定。 本标准的检出限为3?μg。 2??规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T?6682 分析实验室用水规格和试验方法 HG/T?2843 化肥产品 化学分析常用标准滴定溶液、标准溶液、试剂溶液和指示剂溶液 3??方法原理 将尿素中的多肽（聚天门冬氨酸）水解成天门冬氨酸，在碱性条件下，天门冬氨酸与异硫氰酸苯酯 反应，采用反相液相色谱法进行多肽含量（以天门冬氨酸计）的测定，外标法定量。 4??仪器设备 仪器设备包括： a)??高效液相色谱仪：带紫外检测器； b)??超声波清洗器； c)??压力蒸汽器：额定压力为?0.14?Mpa； d)??恒温水浴锅； e)??旋转蒸发仪； f)??分析天平：感量?0.0001?g； g)??水解管：50?mL； h)??针头过滤器：带?0.45?μm?有机相过滤膜。 5??试剂和溶液 5.1??本标准所用试剂在没有注明其他要求时，均使用分析纯试剂；色谱流动相的配制使用?GB/T?6682 规定的一级水，其他使用三级水。 5.2??试验中所用制剂及制品、试剂溶液在没有注明其他要求时，均按?HG/T?2843?的规定制备。 5.3??试剂和溶液主要包括： a)??甲醇：色谱纯； 1 天门冬氨酸标准溶液体积，mL 对应的天门冬氨酸质量，μg 0.00a 0 0.10 10 0.20 20 0.40 40 0.60 60 0.80 80 a?试剂空白溶液 DB37/T?2121—2012 b)??三乙胺； c)??正己烷； d)??盐酸； e)??异硫氰酸苯酯-甲醇溶液：移取?1.2?mL?异硫氰酸苯酯，溶于?100?mL?甲醇中。此溶液室温下可 保存一周； f)??盐酸溶液：c（HCl）＝0.1?mol/L； g)??氨水溶液：1+4； h)??乙酸铵溶液：c（CH3COONH4）＝0.05?mol/L，pH＝6.0～6.5。称取?1.93?g?乙酸铵加入?500?mL 水溶解，用氨水溶液调节?pH?为?6.0～6.5，经?0.45?μm?滤膜过滤，于超声波清洗器中超声脱气 30?min； i)??苯酚：称取?100?g?苯酚于?250?mL?蒸馏烧瓶中，连接旋转蒸发仪，调节真空度约为?0.5?MPa， 加热蒸馏，收集馏出的苯酚，现用现蒸； j)??天门冬氨酸标准储备液（1.0?mg/mL）：称取天门冬氨酸?0.1?g（精确到?0.0002?g）于?50?mL 烧杯中，加盐酸溶液溶解，转移至?100?mL?容量瓶中，用盐酸溶液（定容至刻度。此标准储备 液于?4?℃下可保存两周； k)??天门冬氨酸标准工作溶液（100?μg/mL）：移取?5.00?mL?天门冬氨酸标准储备液，置于?50?mL 容量瓶中，用盐酸溶液定容至刻度，摇匀，现用现配。 6??分析步骤 6.1??天门冬氨酸标准系列的制备 按表1所示，分别移取0.00?mL，0.10?mL，0.20?mL，0.40?mL，0.60?mL，0.80?mL天门冬氨酸标准 工作溶液置于6个10?mL具塞试管中，加盐酸溶液至1.00?mL，加入1?mL三乙胺、1.5?mL异硫氰酸苯酯- 甲醇溶液，加甲醇至5?mL，置于50?℃水浴中加热反应1?h。冷却至室温，加入3?mL正己烷，振摇2?min， 静置10?min后弃去上层溶液，再加入3?mL正己烷，振摇2?min，静置10?min后弃去上层溶液，用注射器 取下层溶液1?mL，用针头过滤器过滤，备用。 表1??天门冬氨酸标准系列 6.2??试验溶液的制备 称取试样2?g～3?g[准确至0.0002?g，以含多肽（以天门冬氨酸计）1?mg～2?mg为宜]，置于水解管 中，加入20?mL盐酸，0.3?g苯酚，放入压力蒸汽器内，待到额定压力时开始计时，水解1.5?h。冷却后 将试液转移至蒸发皿中，于沸水浴上蒸干。沿蒸发皿壁加