蛋白质的性质实验(一).docVIP

. 蛋白质的性质实验（一） 蛋白质及氨基酸的呈色反响 一、目的 1．认识组成蛋白质的基本构造单位及主要连结方式。 2．认识蛋白质和某些氨基酸的呈色反响原理。 3．学习几种常用的判定蛋白质和氨基酸的方法。 二、呈色反响 （一）双缩脲反响 1．原理 尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能 与Cu2+联合生成紫红色化合物，此反响称为双缩脲反响。蛋白质分子中有肽键，其构造与双缩脲相像，也能发生此反响。可用于蛋白质的定性或定量测定。 双缩脲反响不单为含有两个以上肽键的物质全部。含有 一个肽键和一个—CS—NH2，—CH2—NH2，—CRH—NH2，—CH2—NH2—CHNH2—CH2OH或—CHOHCH2NH2等基团的物质以及 全部蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩 脲反响，但有双缩脲反响的物质不必定都是蛋白质或多肽。 2．试剂 精选 . 3．操作 取少许尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使尿素融化。融化的尿素开始 硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷后，加10％氢氧化钠溶液约1mL，振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴，再振荡。察看出现的粉红颜色。要防止增添 过度硫酸铜，不然，生成的蓝色氢氧化铜能掩饰粉红色。 向另一试管加卵清蛋白溶液约1mL和10％氢氧化钠溶液约2mL，摇匀，再加1％硫酸铜溶液2滴，随加随摇。察看紫玫瑰色的出现。 精选 . （二）茚三酮反响 1．原理 除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反响产生黄色物质外，全部α-氨基酸及全部蛋白质都能和茚三酮反响生成蓝紫色物质。 β-丙氨酸、氨和很多一级胺都呈正反响。尿素、马尿酸、二酮吡嗪和肽键上的亚氨基不体现此反响。所以，固然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反响，但能与茚三酮呈阳性反响的不必定就是蛋白质或氨基酸。在定性、定量测定中，应严防扰乱物存在。 该反响十分敏捷，1∶1500000浓度的氨基酸水溶液即能给出反响，是一种常用的氨基酸定量测定方法。 茚三酮反响分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被复原成复原型茚三酮；第二步是所形成的复原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。 此反响的适合pH为5～7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不一样pH条件下的颜色深浅不一样，酸度过大时甚至不显色。 2．试剂 3．操作 （1）取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液 mL，再各加0.5 mL0.1 ％ 茚三酮水溶液，混匀，在开水浴中加热 1～2分钟，察看颜色由粉色变紫红色再变 蓝。 （2）在一小块滤纸上滴一滴0.5％甘氨酸溶液，风干后再在原处滴一滴 0.1 ％ 茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色察看紫红色斑点的出现。 （三）黄色反响 1．原理 含有苯环构造的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成深橙色的硝醌酸钠。反响式以下： 多半蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反响，苯丙氨酸不易硝化，需加入少许浓硫酸才有黄色反响。 2．试剂 （1）鸡蛋清溶液100mL 精选 . 将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1∶20混匀，而后用6层纱布过滤。 （2）大豆提取液100mL 将大豆浸泡充分吸胀后研磨成浆状再用纱布过滤。 （3）头发 （4）指甲 （5）0.5％苯酚溶液50mL 3．操作 向7个试管中分别按下表加入试剂，察看各管出现的现象，有的试管反响慢可 略搁置或用微火加热。待各管出现黄色后，于室温下逐滴加入10％氢氧化钠溶液至碱性，察看颜色变化。 （四）考马斯亮蓝反响 1．原理 考马斯亮蓝G250拥有红色和蓝色两种色彩。在酸性溶液中，其以游离态存在呈棕红色；当它与蛋白质经过疏水作用联合后变成蓝色。 精选 . 它染色敏捷度高，比氨基黑高3倍。反响速度快，约在2分钟左右时间达到均衡，在室温一小时内稳固。在0.01～1.0mg蛋白质范围内， 2．试剂 （1）蛋白质溶液（鸡蛋清∶水=1∶20）5mL （2）考马斯亮蓝染液300mL 精选 . 考马斯亮蓝G250100g溶于50mL95％乙醇中，加100mL85％磷酸混匀，配成原液。临用前取原液15mL，加蒸馏水至100mL，用粗滤纸过滤后，最后浓度为0.01％。 3．操作 取2支试管，按下表操作 思虑题 经过本实验你掌握了几种判定蛋白质和氨基酸的方法？它们的原理？ 若有侵权请联系见告删除，感谢你们的配合！ 精选