保元汤物质基准uplc-pda指纹图谱的建立及成分指认.docxVIP

保元汤物质基准uplc-pda指纹图谱的建立及成分指认 宝元汤是著名的古代经典方剂目录（第一批）。 保元汤的现代研究目前仅涉及到药理研究和临床应用方面，化学成分研究很少，对其指纹图谱研究至今未见报道。基于此，本实验应用现代工艺进行保元汤物质基准的制备，通过色谱技术和质谱技术对各成分进行分离鉴定研究。利用UPLC-PDA技术建立了保元汤物质基准的指纹图谱，并通过UPLC-ESI-MS/MS进一步对共有峰进行研究，指认了22个共有峰，可为保元汤质量标准的制定及成药的开发奠定基础。 1 药材来源及热价 ACQUITY UPLC H-Class型超高效液相色谱仪和Vion IMS Q TOF型离子淌度分析高分辨质谱仪（美国Waters公司），Quintix 125D-1 CN型1/1万电子分析天平（德国赛多利斯公司）。甘草酸铵，人参皂苷Rg 保元汤处方药材均采自道地产区，采集批次均超过25批，经中国中医科学院中药研究所陈士林研究员鉴定，人参为五加科植物人参Panax ginseng的干燥根和根茎，黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus var.mongholicus的干燥根，甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis的干燥根和根茎，肉桂为樟科植物肉桂Cinnamomum cassia的干燥树皮，生姜为姜科植物姜Zingiber officinale的新鲜根茎，按照2015年版《中华人民共和国药典》（简称《中国药典》）要求炮制加工，制成饮片，经鉴甄检测技术（上海）有限公司按2015年版《中国药典》要求全检，各挑选15批合格饮片，各药材产地与批号信息详见表1。将各批饮片随机组合，根据《古代经典名方中药复方制剂及其物质基准申报资料要求（征求意见稿）》 2 方法和结果 2.1 条件1 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，ACQUITY UPLC BEH Shield C 2.2 标准物质的制备 分别取人参皂苷Rb 2.3 保元汤基准冻干粉的制备 保元汤物质基准的制备方法参照《古代经典名方中药复方制剂及其物质基准申报资料要求（征求意见稿）》，根据明代一钱=3.73 g和一分=0.373 g折算，确定处方为人参3.73 g，黄芪7.46 g，甘草1.86 g，肉桂0.75 g，生姜1片按3 g折算。分别按表2中组合称取4倍处方量饮片，放入煎药壶中，浸泡30 min，一煎加水800 mL，煎煮60 min，二煎加水760 mL，煎煮40 min，减压浓缩后进行冷冻干燥，即得保元汤物质基准冻干粉，批号分别记为BYT01～BYT15。分别取BYT01～BYT15冻干粉约0.2 g，精密称定，置15 mL量瓶中，加50%甲醇超声处理（功率250 W，频率40 kHz)30 min，放冷，加50%甲醇定容至刻度，摇匀，经0.22μm微孔滤膜过滤，即得。 2.4 耐试验 2.4.1 酸水溶液洗脱系统 分别考察了甲醇-水、甲醇-甲酸水溶液、乙腈-甲酸水溶液、甲酸乙腈混合液-甲酸水溶液等洗脱系统，结果表明甲酸乙腈混合液-甲酸水溶液系统的分离效果较好，进一步考察了甲酸乙腈混合液-甲酸水系统中甲酸的比例，最终确定以0.05%甲酸水溶液为流动相A,0.05%甲酸乙腈溶液为流动相B进行梯度洗脱的效果较好。 2.4.2 样品溶液的制备方法 分别考察了3种不同型号C 2.4.4 柱温的确定 分别在20,30,40℃不同柱温条件下考察柱温对分离条件的影响，结果表明不同柱温条件下色谱图整体变化较小，说明柱温影响不显著，拟采用柱温30℃。 2.5 方法研究 2.5.1 仪器精密度试验 取批号BYT01的保元汤物质基准，按2.3项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件连续进样6次，结果显示各共有峰在2个波长条件下保留时间的RSD均≤1.0%，峰面积的RSD均≤2.0%，表明仪器精密度良好。 2.5.2 重复性试验 取批号BYT01的保元汤物质基准6份，按照2.3项下方法制备6份供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定，结果显示各共有峰在2个波长条件下保留时间的RSD均≤1.0%，峰面积的RSD均≤5.0%，说明该方法重复性良好。 2.5.3 溶液稳定性试验 取同一批次保元汤物质基准，按2.3项下方法制备供试品溶液，分别于配制后0,2,8,10,16,24 h按2.1项下色谱条件测定，结果显示各共有峰在2个波长条件下保留时间的RSD均≤1.0%，峰面积的RSD均≤3.0%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。 2.6 指纹谱的构建 2.6.1 指纹图谱的制备 按2.3项下方法制备15批保元汤物质基准供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样分析，记录色谱图，以峰面积占总峰面积0.1%进行积分，分别将203 nm和260 nm处得到的色谱图导入