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实验细胞中多糖和过氧化物酶的定位 【实验目的】 掌握显示细胞中多糖和过氧化物酶反应的原理和方法。 【实验原理】 高碘酸—雪夫试剂反应简称 PAS 反应。主要是利用高碘酸作为强氧化剂这种强氧化剂能打开 C-C 键使多糖分子中的乙二醇变成乙二醛氧化所得到的醛基与Schiff 试剂反应形成紫红色化合物。颜色的深浅与糖类的多少有关。 细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色或棕色络合物根据蓝色或棕色的出现来表示过氧化物酶的存在。 PAS 反应过程如下过氧化物酶联苯胺反应过程如下【实验仪器、材料和试剂】一仪器显微镜、镊子、染色钵、刀片、载玻片、盖玻片、吸水纸等二材料马 铃薯块茎、洋葱根尖或洋葱鳞茎三试剂 1 高碘酸溶液高碘酸 HIO4·2H2O0.4g95 乙醇 35mlM/5 醋酸钠溶液 2.72g 醋酸钠溶于 100mlH2O5ml 蒸馏水 10ml2Schiff 试剂配法见Feulgen 反应 3 亚硫酸水溶液配法见Feulgen 反应 470 乙醇 5 联苯胺溶液在 0.85 盐水内加入联苯胺至饱和为止临用前加入 20 体积的 H2O2 每 2ml 加一滴。 60.1 钼酸铵溶液称取 0.1g 钼酸铵溶于 100ml0.85 盐水【方法与步骤】 一细胞中多糖的测定高碘酸—雪夫PAS 反应1 把马铃薯块茎用刀片徒手切成薄片。 浸于高碘酸溶液 515min。 移入 70 乙醇中浸片刻。 4Schiff 试剂染色 15min。 亚硫酸溶液洗三次每次 1min。 蒸馏水洗片刻。 装片镜检。 镜检结果细胞中多糖部位呈现紫红色见 41。 二细胞中过氧化物酶的测定联苯胺反应1 把洋葱根尖徒手切成2040μm 厚的薄片或用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块。 浸在溶有 0.1 钼酸铵的 0.85 盐水溶液中 5min 钼酸铵的作用是催化剂。 浸在联苯胺溶液内 2min 至切片出现蓝色。 在 0.85 盐水溶液中洗 1min。 将薄片置于载玻片上展开盖上盖玻片显微镜检查。结果细胞中有蓝色沉淀出现见 42。 【作业】 简述 PAS 反应及联苯胺反应的原理。 绘图示细胞中多糖及过氧化物酶的分布。