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基因工程课程教学大纲 Gene Engineering 学 时 数：32 其中：实验学时： 课外学时： 学分数：2 适用专业：生物技术专业 一、课程性质、目的和任务 性质：生物技术专业必修专业课。 目的：系统学习作为生物工程核心的基因工程，为以后学习和工作奠定坚实基础。 任务：通过本课程的学习，要求掌握基因工程的基本原理和各项常规基因操作技术，培养学生利用基因工程手段解决实际问题的能力，为进一步学习、科研或工作打下重要基础。 二、课程教学的基本要求 了解基因工程研究路线、研究内容以及基因工程研究发展前景。 重点掌握基因工程基本原理和常规操作技术。 了解基因工程安全管理条例。 三、课程教学内容、重点和难点 绪论 （一）基因工程研究概述：基因工程含义、理论依据、基本技术路线、发展史。 （二）基因工程研究内容：基础研究，应用研究。 （三）基因工程的安全性问题。 （四）基因工程研究发展前景。 重点：基因工程研究内容，基本技术路线及发展前景。 重点：基因工程研究内容，基本技术路线及发展前景。 难点：基因工程基本技术路线。 第一节 DNA的提取与纯化 第二节 DNA的凝胶电泳 第三节 核酸的分子杂交 第四节 基因扩增技术-----PCR 第五节 DNA序列分析 重点： 重点：基因操作技术。 难点：基因操作技术原理及应用。 基因克隆的酶学基础 限制性内切酶：常用限制性内切酶的及其作用机制、识别位点、切割位点和Star活性，DNA分子片段化及其限制性图谱。 连接酶：连接酶作用机制及DNA片段的连接。 DNA聚合酶：常用DNA聚合酶（Klenow酶、反转录酶等）的特性及DNA片段标记。 DNA及RNA的修饰酶：末端转移酶、碱性磷酸酶、T4多核苷酸激酶等修饰酶活性及应用。 重点 重点：基因克隆常用工具酶的作用。 难点：影响酶学活性的因素。 第三章　基因克隆载体 （一）质粒克隆载体：相关的质粒性质，构建的基本策略及其构建。 （二）病毒克隆载体：λ噬菌体、cosmid、M13噬菌体克隆载体等。 （三）染色体定位整合克隆载体。 （四）人工染色体克隆载体：含义、特点、构建、应用。 （五）特殊用途克隆载体：启动子探针型克隆载体、诱导型表达克隆载体等。 重点： 重点：克隆载体的构成，用途。 难点：克隆载体的构成。 第四章　目的基因的获取 （一）目的基因：组成、排列。 （二）目的基因的制备：直接分离法、基因组文库构建、cDNA基因文库的构建。 （三）目的基因的分离：功能克隆、序列克隆、差示分析法等。 重点 重点：目的基因的排列，目的基因的制备和分离方法及原理。 难点：目的基因制备和分离。 第五章　DNA体外重组与转化 第一节 DNA片段的体外连接 一、粘性末端的连接 二、齐平末端（blunt end）的连接 三、PCR产物的连接 四、DNA体外连接应注意事项 五、载体分子和外源DNA插入片段的连接结果 第二节 重组体导入细菌细胞 一、感受态大肠杆菌的制备 二、重组DNA导入大肠杆菌 重点： 重点： DNA重组连接及转化。 难点： DNA重组连接。 重组体的选择和鉴定 第一节 载体表型选择法 第二节 根据插入序列的表型特征选择 第三节 DNA电泳检测法 第四节 核酸杂交检测法 第五节 免疫化学检测法 重点：重组体筛选方法的原理及应用。难点 重点：重组体筛选方法的原理及应用。 难点：重组体筛选原理。 第七章　外源基因的表达 第一节 外源基因在原核细胞中的表达 一、原核生物基因表达的特点 二、原核表达系统的注意事项 三、原核生物基因表达的调控 四、外源蛋白在大肠杆菌中的表达部位 五、几种类型的原核表达载体 六、影响外源基因表达效率的因素 七、提高表达水平常用的方法 八、外源蛋白质表达后的正确修饰 第二节 外源基因在真核细胞中的表达 一、在酵母中表达 二、昆虫培养细胞表达系统 三、外源基因在植物中表达 重点：外源基因的原核表达及酵母表达。难点 重点：外源基因的原核表达及酵母表达。 难点：基因表达调控、不同表达系统特点。 四、课程各教学环节要求 课堂教学内容以教材内容为蓝本，适当拓展知识点，发挥同学们的主观能动性，提高学习兴趣。 五、学时分配 教学内容 各教学环节学时分配 作业 题量 备 注 章节 主要内容 讲授 实验 讨论 习题 课外 其它 小计 绪论 2 2 第一章　 基因操作的主要技术原理 8 8 第二章　 基因工程酶学基础 4 4 第三章　 基因工程载体 4 4