免疫组化讲课原理及方法.ppt

免疫组织化学技术的原理及方法;免疫组织化学技术的原理及其方法;一、免疫组化技术的根本知识;一、 免疫组化技术的根本知识;免疫球蛋白的化学构造及其模式图;免疫球蛋白的化学构造及其模式图;多克隆抗体与单克隆抗体及其产生;多克隆抗体与单克隆抗体及其产生;多克隆抗体与单克隆抗体及其产生;免疫小鼠Mouse;;;;标记抗体;酶 — 抗酶抗体复合物;亲和素—生物素复合物〔 Avidin-Biotin Complex ABC 〕; 酶标亲和素〔Labelled streptavidin〕;多聚物载体;;二步法：EnVision;;二、免疫过氧化物酶染色技术的根本原理;免疫过氧化酶染色技术的根本原理;识别系统;显示系统;显示系统;免疫过氧化酶染色的多种方法中，其主要的不同点在于显色系统的差异： 间接酶标法：利用标记于桥联抗体的酶 PAP法： 利用PAP复合物 ABC法： 利用AB复合物 LSAB法: 利用直接标记于亲和素的酶 EPOS一步法及EnVision二步法：多聚物载体 ;联结系统;三、免疫组化染色方法的类别;免疫组化染色方法的类别;直接法;;间接法;Primary Antibody;PAP法〔Peroxidase-AntiPeroxidase，过氧化酶-抗过氧化酶法〕;PAP法〔Peroxidase-AntiPeroxidase，过氧化酶-抗过氧化酶法〕;PAP;ABC法〔Avidin-Biotin Complex，亲和素-生物素法〕;亲和素—生物素复合物〔 Avidin-Biotin Complex ABC 〕;ABC法〔Avidin-Biotin Complex，亲和素-生物素法〕;;ABC与PAP 法的比较;LSAB〔SP〕法〔labelled streptavidin biotin method〕标记的链霉亲和素-生物素法; 酶标亲和素〔Labelled streptavidin〕;SP;ABC与LSAB(SP)法的比较;一步法〔EPOS〕及两步法〔Envision〕;多聚物载体;;二步法：EnVision;;;Primary Antibody;四、免疫组化染色结果的判断及异常着色的原因分析及其对策;特异性着色具备特点 特定的组织 特定的定位 特定的细胞 特定的细胞内的部位 分布上的不均一 着色的不均一性 着色强度的不均一 颗粒性显色：DAB显色剂应为棕黄到棕褐色;CK染色，结肠腺癌细胞膜特异性着色;Kappa 胞浆着色;TdT染色，胞核着色;PR 胞核着色;ER 胞核着色;免疫组化染色结??的判断;异常着色〔假阳性〕原因及对策;内源酶及内源生物素;抗体自身原因;异常着色原因及对策;异常着色原因及对策;电荷吸附;假阴性的原因分析及对策;无信号片;Mart-1染色;假阴性的原因分析及对策;操作不当 掉片 消化了不该消化的靶抗原 切片放置不平抗体流失 遗漏重要操作步骤〔如漏加HRP的底物〕 显色时间过短;谢谢！免疫组织化学技术的原理及方法;免疫组织化学技术的原理及其方法;一、免疫组化技术的根本知识;一、 免疫组化技术的根本知识;免疫球蛋白的化学构造及其模式图;免疫球蛋白的化学构造及其模式图;多克隆抗体与单克隆抗体及其产生;多克隆抗体与单克隆抗体及其产生;多克隆抗体与单克隆抗体及其产生;免疫小鼠Mouse;;;;标记抗体;酶 — 抗酶抗体复合物;亲和素—生物素复合物〔 Avidin-Biotin Complex ABC 〕; 酶标亲和素〔Labelled streptavidin〕;多聚物载体;;二步法：EnVision;;二、免疫过氧化物酶染色技术的根本原理;免疫过氧化酶染色技术的根本原理;识别系统;显示系统;显示系统;免疫过氧化酶染色的多种方法中，其主要的不同点在于显色系统的差异： 间接酶标法：利用标记于桥联抗体的酶 PAP法： 利用PAP复合物 ABC法： 利用AB复合物 LSAB法: 利用直接标记于亲和素的酶 EPOS一步法及EnVision二步法：多聚物载体 ;联结系统;三、免疫组化染色方法的类别;免疫组化染色方法的类别;直接法;;间接法;Primary Antibody;PAP法〔Peroxidase-AntiPeroxidase，过氧化酶-抗过氧化酶法〕;PAP法〔Peroxidase-AntiPerox