YCT 283-2009烟草及烟草制品 淀粉的测定 酶水解-离子色谱法.pdf

ICS 65. 160YCX 87备案号：25966—2009中华人民共和国烟草行业标准YC/T 283—2009烟草及烟草制品淀粉的测定酶水解一离子色谱法Tobacco and tobacco products---Determination of starch-Enzyme hydrolysis-ion chromatography2009-03-30 发布2009-05-01实施国家烟草专卖局发布 YC/T 283—2009前言本标准的附录 A 和附录 B为资料性附录。本标准由国家烟草专卖局提出。本标准由全国烟草标准化技术委员会卷烟分技术委员会（SAC/TC 144/SC1)归口。本标准起草单位：上海烟草(集团)公司、中国烟草标准化研究中心、广东中烟工业有限责任公司、湖南中烟工业有限责任公司。本标准主要起草人：孙文梁、周宛虹、余永桢、韩云辉、陈连芳、沈光林、胡静、施文庄、吴名剑、苏行、韩星。1 YC/T 283-2009烟草及烟草制品淀粉的测定酶水解-离子色谱法1范围本标准规定了烟草及烟草制品中淀粉的酶水解-离子色谱测定方法。本标准适用于烟草及烟草制品中淀粉的测定。本方法测定淀粉的定量检出限为 0.05 mg/g。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682一2008,ISO3696：1987MOD)YC/T31烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法3原理水解成葡萄糖，通过离子交换分离后定量检测葡葡糖，进而计算得出烟草或烟草制品中的淀粉含量。4 试剂除特殊要求外，均应使用分析纯试剂。水应符合 GB/T 6682 中一级水的规定。4.1氢氧化钠溶液，50%（质量分数）。4.2乙醇溶液，80%（体积分数）。4.3 α-淀粉酶,50 U/mg。来源:Bacillus subtilis。注：1 个 α-淀粉酶活力单位(U)定义为可在 pH 6.9,25 ℃下每分钟水解淀粉生成 1 μmol 麦芽糖。4.4 淀粉葡萄糖苷酶(AGS),70 U/mg。来源:Aspergillus niger。注：1 个淀粉葡药糖苷酶活力单位(U)定义为可在 pH 4. 8,60 ℃下每分钟水解淀粉生成 1 μmol 葡药糖。4.5 磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲溶液,0.10 mol/L,pH 6.0。4.6 乙酸-乙酸钠缓冲溶液,0.10 mol/L,pH 4.6。配即用。4.8苯甲酸溶液,0.1%（质量分数）。4.9标准溶液4.9.1葡萄糖标准储备液称取约 50 mg 葡萄糖,精确至 0.1 mg，以 0.1%苯甲酸溶液(4.8)溶解并定容于 100 mL容量瓶中。葡萄糖标准储备液应置于 4℃下保存,有效期 6个月。取用时，应在达到常温后使用。4. 9.2葡萄糖工作标准液1 YC/T 283--200925 mL容量瓶中，以0.1%苯甲酸溶液（4.8)稀释定容，得到葡萄糖工作标准液。4.10流动相：移取50%氢氧化钠溶液（4.1)适量，稀释定容，配制200 mmol/L氢氧化钠溶液，作为流动相 A。流动相 B为一级水。5仪器及材料5.1旋风式样品磨，40 目筛。5.2 分析天平,精确至 0.1 mg。5.3连续萃取装置，参见附录 A。5.4双层滤纸杯。5.5常规玻璃仪器。5.6真空抽滤装置。5.7电热恒温水浴锅。5.8离子色谱仪，配置二元梯度泵和电化学检测器。5.9糖离子交换柱，固定相为苯乙烯-二乙烯基苯共聚物，官能团为功能性季胺盐，分析柱 3 mmX150 mm,保护柱 3 mmX30 mm。6 制样和水分的测定按 YC/T 31进行试样的制备和水分的测定。7 分析步骤7.1样品前处理7.1.1乙醇提取取的试样置于连续萃取装置(5.3)内，以100mL乙醇溶液(4.2)于100℃水浴中提取2.0 h。7. 1. 2 酶水解氢二钠缓冲溶液(4.5)和 25 mg α-淀粉酶(4.3），在 100 ℃水浴中水解 1.5 h。将 α-淀粉酶水解液()冷却至 60 ℃，依次加人 50 mL 乙酸-乙酸钠缓冲溶液(4.6)和8.0 mL淀粉葡萄糖苷酶溶液(4.7),在 60℃水浴中水解2.0 h。水解完毕取出锥形瓶，立即抽滤，用约 50 mL苯甲酸溶液（4.8)清洗滤纸和滤渣。合并滤液和清洗液于 250 mL容量瓶中，以 0.1%苯甲酸溶液(4.8)稀释定容,得到 A溶液。7. 1.3溶液稀释到 B 溶液。当 B溶液（）中的葡萄糖含量超出标准工作曲线的定量范围