DB37_T 3309-2018化妆品中维生素D2和维生素D3测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 71. 100. 70Y42DB37山東东省地方标准DB 37/T 3309—2018化妆品中维生素D2和维生素D3测定高效液相色谱法Determination of Vitamin D2 and Vitamin D3 in Cosmetic by High PerformanceLiquid Chromatography2018-06-12发布2018-07-12实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 3309—2018前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省质量技术监督局提出。本标准由山东化工标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省产品质量检验研究院、山东福瑞达生物工程有限公司。本标准主要起草人：朱海荣、焦毅、商姆娜、田静、刘金风、王灵玺、王东岳、刘鹏飞、赵丽芳、周莉莉、姜金华、张娟、杨素珍。- DB37/T 3309—2018化妆品中维生素D2和维生素D3测定高效液相色谱法1范围本标准规定了化妆品中维生素D2、维生素D3的高效液相色谱法。本标准适用于化妆品中维生系D2、维生素D3的检测。本方法取样量为0.5g时，维生素D2检出浓度为3.6mg/kg，最低定量浓度为10mg/kg。维生索D3检出浓度为1.8mg/kg，最低定量浓度为5mg/kg2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要3. 1维生素D2和维生素D3在265nm处有紫外吸收，可用反相高效液相色谱法分离，并根据保留时间和紫外光谱图定性，外标法定量。3.2试剂和溶液除另有说明外，所用试剂均为色谱纯，水为GB/T6682规定的一级水。4试剂和材料4.1甲醇。4.2乙腈。4.3维生素D：纯度≥99.0%。4. 4维生素D：纯度≥99.0%。4.5混合标准储备溶液：分别准确称取维生素D20.1000g及维生素Ds0.2000g，移入100mL容量瓶中，用甲醇（4.1）溶解并定容至刻度，摇勾，作为标准储备溶液。避光保持，保存期不超过2周，5仪器与设备5.1高效液相色谱仪：紫外或二极管阵列检测器。5.2紫外分光光度计。5.3超声波清洗器。5.4分析天平：感量0.0001g-5.5有机相微孔滤膜：0.45μm6分析步骤 DB37/T 330920186.1样品预处理称取样品约0.5g（精确至0.0001g）于10mL具塞比色管中，用流动相定容至刻度，摇匀，超声提取30min。经0.45μm有机相微孔滤膜过滤，滤液作为待测样液。6.2色谱参考条件6. 2. 1色谱柱：C18柱，250mmX4.6m，5μ.6. 2. 2检测器：二极管阵列检测器。6. 2. 3检测波长：265nm。6. 2. 4流动相：甲醇+乙睛=90+10（HPLC分析前，经0.45μm滤膜过滤及真空脱气）6. 2. 5流速：1.0 mL/min。6. 2. 6进样量：10μL.6. 2. 7柱温：室温6. 2. 8其它能够达到同等分离效果的色谱条件均可使用。6.3标准曲线的制备6.3.1纯度校正由于维生素D和维生素D,对光不稳定，固此在配置标准溶液之前需用紫外分光光度法进行纯度校正，方法如下：维生素D:和维生素D,在263nm波长处有最大紫外吸收，而乙醇在该波长无吸收。95%乙醇溶液中，质量分数为1%的维生素D溶液的吸光系数61%为460，质量分数为1%的维生素D,溶液的吸光系数6%为485，吸光系数相当于吸光度/浓度，因此通过测定吸光度可得出所配置溶液的准确浓度，进而校正纯度。维生素D和维生素D的纯度按照式（1）计算。CemL(1)式中：维生素D、维生素D的纯度，%：维生素D、维生素D的吸光度，单位为毫克每升（mg/L）：维生素D、维生素D:的质量分数，%：L—比色Ⅲ的光径，单位为厘米（cm）：维生素D2、维生素D,的吸光系数。6.3.2标准曲线的绘制分别准确移取一定量维生素D和维生素D的标准储备液（4.5），用流动相将标准工作落液中稀释成一系列浓度的标准落液，其中标准落液中维生素D的浓度分别为200g/L、100mg/L、80mg/L、50g/L、20g/L、10g/L，标准落液中维生素D,的浓度分别为400mg/L、200mg/L、160mg/L、100mg/L、40mg/L、20mg/L按照浓度由低到高的顺序依据色谱条件（6.2）分别测定，以标准工作溶液浓度为横坐标，相应色谱峰峰面积为纵坐标，分别维生素D:、维生素D绘制标准工作曲线。标准物质色谱图参见附录A，标准物质紫外吸收光谱图参见附录B。6.4试样测定2 DB37/T预处理后的待测液（6.1