DB37T 1206-2009饲料中孔雀石绿的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120B 20DB37山东省地方标准DB37/T料中孔雀石绿的测定高效液相色谱法Determination of malachite green and leucomalachite green in feedsHigh-Performance Liquid Chromatography2009-03-03发布2009-04-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T标准附录A为资料性附录。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：山东省饲料质量检验所。本标准主要起草人：李会荣、李俊玲、强莉、宫玲玲、孙延军。 DB37/T1206—2009饲料中孔雀石绿的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中孔雀石绿和无色孔雀石绿的方法。本标准适用于鱼粉、配合饲料、浓缩饲料和复合预混合饲料中孔雀石绿和无色孔雀石绿的测定。本方法最低定量限为10μg/kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的弓用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3原理试样中的孔备石绿用孔备石绿快速检测前处理试剂盒提供的试剂提取、浓缩后在高效波相色谱仪（HPLC）氰基柱上分离，用二极管阵列检测器初步定性，紫外可见光检测器618rm处测定。4试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。水，符合GB/T6682一级水的规定。4.1乙睛：色谱纯。4.2无水乙酸钠。4.3甲醇：色谱纯。4.4冰乙酸：色谱纯。4.5异丙醇。4.6对-甲苯磷酸。4.7无水乙酸铵。4.8乙酸钠缓冲溶液：称取4.96g无水乙酸钠和10.96g对-甲苯磺酸溶解于约800L水中，用冰乙酸调节至4.5，用水定至1000L。过045μ=滤膜，备用。4.9流动相：乙睛+乙酸钠缓冲液（4.8）=60十40，混匀，超声脱气5mim~10min。4.10孔雀石绿快速检测前处理试剂盒1。试剂盒中包括：4.10.1提取剂1（液体为20.0mL)：4.102提取剂2（周体约10g)；4.103孔雀石绿专用固相萃取小柱。4.11洗脱液I：乙腈十冰乙酸一98十2。4.12洗脱液II：乙睛+冰乙酸=95+5。4.13洗涤剂I：冰乙酸+甲醇=20+80。4.14洗涤剂II：乙腈+水=20+801）孔雀石绿快速检测前处理试剂盒是由中国检验检疫科学研院研发北京路析商检新技术公司所生产产品的商品名称。给出这一信息是为了给本标准的使用者提供方便，而不是标准主管部门对这一产品的认可。1 DB37/T1206—20094.155乙酸铵缓冲液：称取3.85g无水乙酸铵，溶解于980L水中，用冰乙酸调节pH至5.0，最后定容至1000mL。过0.45Hm滤膜，备用。4.16孔雀石绿和无色孔雀石绿标准品：纯度大于95%。4.17孔雀石绿标准亡备济液：准确称取孔雀石绿0.1000g于100L棕色容量瓶中，加30nL乙睛溶解后，用乙睛定容。该溶液浓度为1mg/nL。避光保存。-18℃保质期2个月。4.18无色孔雀石绿标准亡备溶液：准确称取无色孔雀石绿0.1000g于100L棕色容量瓶中，加30=L乙睛溶解后，用乙睛定容。该游液浓度为1g/L。避光保存。-18℃保质期2个月。4.19孔雀石绿和无色孔雀石绿混合中间液：准确移取孔雀石绿标准亡备溶液（4.17）和无色孔雀石绿标准贮备游液（4.18）各1mL，置于100mL棕色容量瓶中，用乙睛定容。该蒂液孔雀石绿和无色孔雀石绿浓度均为10Hg/mL。2C～8℃保质期1个月。L，置于100mL棕色容量瓶中，用流动相（4.9）定容。该落液孔雀石绿和无色孔雀石绿浓度均为100ng/ml。现用现配。仪器和设备5.1分析天平：感量0.lmg。5.2超纯水器。5.3旋涡混合器。5.4离心机：转速5000r/min5.5高效液相色谱仪：配紫外检测器和二极管阵列检测器。5.6固相萃取装置。66试样的制备选取有代表性饲料样品至少500g，按GB/T20195制备样品，粉碎，全部通过孔径为045m的试验筛，混匀。装入密闭容器中避光保存。7分析步疆7.1提取准确称取试样5g（精确至0.0002g），置于50L具塞离心管中，准确加水5山，混匀，室温放置5min加入提取剂1（4.10.1），盖好管盖，于旋涡混合器上涡旋2min。再加入提取剂2（4.10.2），涡旋2min。于离心机5000r/血in离心10mina上清液备用。7.2净化7.21鱼粉、浓缩饲料、配