SC_T 7228-2019CN传染性肌坏死病诊断规程.pdf

ICS 65.020.30B 50Sc中华人民共和国水产行业标准SC/T 7228—2019传染性肌坏死病诊断规程Code of diagnosis for infectious myonecrosis (IMN)2019-08-01发布2019-11-01实施中华人民共和国农业农村部发布 SC/T 7228—2019(规范性附录)试剂配方A. 1戴维森氏AFA(Davidsons AFA)固定液95%乙醇330 mL甲醛(37%)220 mL115 mL过滤海水335 mL混勺勾，室温密封储存。A. 2苏木精染色液水(50℃~60℃)1 000 mL苏木素1. 0 g碘酸钠0. 2 g钾明矾90. 0 g柠檬酸1. 0 g水合三氯乙醛50. 0 g按上述顺序混合，溶解后即可使用，室温储存。A. 31%伊红储存液伊红Y(水溶性)5 g水500 mL溶解后置于棕色瓶中，室温储存。A. 41%焰红储存液焰红B(水溶性)1 g水100 mL溶解后置于棕色瓶中，室温储存，A. 5伊红-焰红染色液1%伊红储存液100 mL1%焰红储存液10 mL95%乙醇780 mL冰酷酸4 mL混勾后即可使用，室温储存。A. 6明胶1g热水100 mL溶解后，加入：苯酚2 g SC/T 7228—2019甘油15 mL混勾，在棕色瓶中室温储存。A.785%乙醇95%乙醇850 mL加水定容至950 mL混匀，室温储存。A. 880%乙醇95%乙醇800 mL加水定容至950 mL混匀，室温鳍存。A. 975%乙醇95%乙醇750 mL加水定容至950 mL混匀，室温储存，A. 1050%乙醇95%乙醇500 mL加水定容至950 mL混匀，室温储存。A.11 DEPC 水灭菌双燕水1 000 mLDEPC1 mL益上瓶塞，用避力揽拌器于37C烈搅拌12h，按50mL/瓶～200mL/瓶分装于无RNA酶的试剂瓶内，103.4kPa121℃高压蒸汽灭菌15min，冷却后密封保存。注意：DEPC有毒，应避免吸人、吞食和沾着皮肤，操作在通风橱中进行。A. 12无RNA酶的75%乙醇无水乙醇(新开瓶)75 ml加人无RNA酶的水25 mL在无RNA随的玻璃量筒中配制，混匀，按1mL/支~1.2mL/支分装于无RNA酶的1.5mL离心管中，保存于一20℃待用。A. 1350×电泳缓冲液Tris242 g冰乙酸57.1mL0. 5 mol/L EDTA (pH 8. 0)100 mL加水定容至1 000 mL室温储存，A. 141×电泳缓冲液50X电冰缓冲液Tul 028 SC/T 7228—2019加水定容至1 000 mL室温储存。A 1510mg/mLEB储存液EB10 mg水1 ml.避力搅拌数小时以确保其完全溶解。室温保存于棕色瓶或用铝铂包寒的瓶中。 SC/T 7228—2019附录B(资料性附录)传染性肌坏死病(IMN)B. 1传染性肌坏死病的发生与流行传染性肌坏死病（Infectiousmyonecrosis，IMN)是由传染性肌坏死病毒（Infectiousmyonecrosis vi-Tus，IMNV)感染所引起的一种对虾急性传染性疾病。急性感染期，对虾横纹肌会出现局部至弥漫的白色坏死区域，通常最早出现在末端腹节及尾扇，有些对虾会出现末端腹节坏死发红，严重感染的对虾出现濒死症状，应激后突发高死亡率，并持续数日。IMNV对凡纳滨对虾的致死率介于40%～70%，感染虾群的饲料转化率比正常值高1.5倍~4.0倍，基至更高。B.2病原和病理学特征IMNV是一种单分病毒，病毒粒子呈二十面体结构，无囊腰，直径40nm，氟化绝浮力密度1.366g/mL，基因组为8226bp~8230bp的单片段双链RNA。包含2个开效阅读框（Openreadingframe,ORF)，ORF1(470nt~5596nt)编码一个可能的RNA结合蛋白和一个衣壳蛋白，ORF2(5884nt~8133nt)编码一个可能的RNA依额的RNA聚合酶，IMNV地理分布主要位于巴西东北部至印度尼西亚等东南亚周边，在养殖和野生对虾中都有检出，巴西与印度尼西亚分离株序列同源性极高。IMN急性和投性感染能出现横纹肌及淋巴器官组织病变，由凡纳滨对虾野田村病毒（Penaeustannameinodavirus，PvNV)引起凡纳滨对虾的白尾病具有类似的病变。宿主易感宿主种类：食用对虾（P.esculentus）、墨吉明对虾（F.merguiensis）和凡纳滨对虾(L.tarnamei)，非完全确认易感性的宿主种类：斑节对虾（P.mowodon）和细角滨对虾（L.stytirostris），另外，有报道在南方竭对虾(P.subtilis)PCR结果显示IMNV阳性，但其感染活性尚未明确。