发育早期大鼠腹腔注射氯胺酮70mg移除电生理海马ca1区突触长时程增强的实验研究.docxVIP

发育早期大鼠腹腔注射氯胺酮70mg移除电生理海马ca1区突触长时程增强的实验研究 术后认知障碍（pocd）是指术前无精神异常的患者对手术期间各种因素的影响，导致术后大脑功能活动的紊乱，包括意识、感知、学习、记忆、方向、精神运动行为和睡眠障碍。目前有研究表明发育早期大鼠吸入相当于麻醉浓度的异氟烷、氧化亚氮、氧的混合气吸入并同时联合咪达唑仑麻醉6 h可以引起大鼠持续性空间辨别学习记忆的改变 1 1.1 实验动物 实验选用SD大鼠, 雌雄不拘 (日龄35～45天) , 各组平均体重和性别比例基本相同, 由徐州医学院实验动物中心提供。 1.2 人工瞳气调节菌acsf ①盐酸氯胺酮注射液, 上海生化药业有限公司, 产品批号030340;②人工脑脊液 (artificial cerebrospinal fluid, ACSF) 各成分含量如下 (mmol/L) :NaCl 124.0, KCl 3.4, KH 1.3 显微微电极器 ①水迷宫, 仿中国医学科学院药物所研制;②解剖显微镜, 玻璃微电极 (南京) , 刺激器, MEZ-8201微电极放大器 (日本) , 静置-灌流两用界面式浴槽, 恒流泵 (上海) 。 1.4 动物组和处理 随机将动物分为Con1组、Con2组、Ket1组、Ket3组、Ket5组。一部分供行为学实验 ( 1.5 马尾藻脑片细胞外记录技术表明，马蹄共1区的触觉时间增加ltp 1.5.1 沿海马槽干片制备 所有动物末次药物处理7天后, 将大鼠用乙醚麻醉后断头取脑, 小心剥离出左侧海马, 取中间1/3段, 沿海马槽走向连续切成350～400 μm的薄片6～8片, 将脑片移至孵育槽内, 持续通入混和气, 温度维持在28 ℃, 孵育90 min后开始实验。实验用静置-灌流两用界面式浴槽, 用ACSF以1～15 ml·min 1.5.2 材料电极的制备 在解剖显微镜下将同心圆电极 (刺激电极) 置于海马Schaffer侧支纤维处, 玻璃微电极 (记录电极, 电阻4～5 MΩ, 内充2 mol·L 1.5.3 实验大鼠脑片兴坚性测定 开始实验后先在记录室中观测脑片电反应恢复后开始实验, 首先由电子刺激器提供脉冲刺激, 刺激海马Schaffer侧支, 可在CA1区观测到一群峰电位 (population spike, PS) , 波幅一般为1～5 mV, 要求在3.5 mV以上, 以保证实验脑片兴奋性。然后用引起PS最大反应50%的强度为测试刺激强度, 每隔60 s给予1次刺激。先记录3次正常的群峰电位振幅 (population spike amplitude, PSA) , 将其平均值作为基础值, 待PS稳定15～20 min后, 在Schaffer侧支上给予高频串刺激 (100 Hz, 4个脉冲) , 高频串刺激后每隔5 min记录1次测试刺激引起的PSA, 观察记录45 min。每只动物记录3张脑片。本实验观测指标:①PSA:实验中以各时间点PSA与串刺激前3个时间点振幅均值相对值为观测指标。②LTP 诱发率:成功诱发LTP的大鼠脑片例数占本组实验大鼠脑片总例数的百分数。LTP诱发成功的判断标准为PS增幅≥30%, 维持时间≥30 min。 1.6 游到安全台的检测 水迷宫空间分辨能力测试于每天上午8:00～11:00实施。实验装置为100 cm×42 cm×25 cm 的茶色玻璃槽, 槽右下角为起点, 左上角设有安全台。槽内被隔成许多条通路, 但只有一条通路能游到安全台, 其他通路均为盲端。实验时槽内水深为 (20±1) cm , 水温 (26±1) ℃。测试时将大鼠先放置于终点区让其爬上安全台3 次, 以适应环境, 然后再将大鼠从起点放入, 观察其游动路线, 从起点开始在120 s内游上安全台为正确, 每次大鼠游上安全台让其休息30 s, 每次训练以120 s为标准, 如游至终点超过120 s以120 s计。连续4次正确到达安全台为学会的标准, 每天测试10次, 连续测试2天, 学会为止, 20次训练测试学不会者以20次计。实验时以大鼠达标所需训练次数、逃避潜伏期 (从起点到登陆终点安全台需要的时间) 及进入盲端的次数衡量大鼠学习记忆的能力。 1.7 统计处理 定量数据均以 2 2.1 电生理的结果 2.1.1 2.1.2 2.2 水迷训练实验结果 发育早期大鼠单次或每3天多次腹腔注射麻醉剂量氯胺酮, 与对照组相比, 7天后水迷宫训练实验中达标所需训练次数、逃避反应潜伏期和进入盲端错误次数组间无显著性差异 (P0.05) , 结果见表2。 3 多次注射氯胺酮对学习记忆功能的影响 是中枢突触经过突触前纤维的强直 (高频) 刺激所诱发产生的传递效应的长时间变化, 是突触可塑性的表现形式之一, 本实验以海马脑