富马酸替诺福韦二吡呋酯胶囊在中国人体内的药代动力学研究.docxVIP

富马酸替诺福韦二吡呋酯胶囊在中国人体内的药代动力学研究 福马酸二羟苯酮（tdf）是一种新型的无环核糖（酸），可用于治疗艾滋病毒和肝脏疾病。目前,TDF在外国人体的药代动力学特征的研究较为全面,分别有75 mg、150 mg、300 mg和600 mg的单次给药和多次给药的药代动力学研究报道 1 1.1 药品、化学品测定 富马酸替诺福韦二吡呋酯胶囊(批号:120301,规格:300 mg/粒)、替诺福韦对照品(批号:120208,含量99.4%)均由福建广生堂药业股份有限公司提供;阿昔洛韦对照品(内标,批号:140530-200602,中国药品生物制品检定所);甲醇、乙腈(色谱纯,美国Merck公司);实验用水为纯净水;其余试剂均为市售分析纯。 1.2 系统和平台研究 Agilent Technologies 6410 Triple Quad LC/MS系统和MassHunter Workstation Software工作站(美国Agilent公司);Satorious电子分析天平(德国赛多利斯股份有限公司)。 2 2.1 层析条件和层析条件 色谱柱为Hedera ODS-2 C 2.2 单-液氧基苯磺酸钠/氮气流法 于2 mL离心管中精密加入血浆样品0.3 mL,精密加入阿昔洛韦内标溶液(2 μg/mL)30 μL,旋涡混匀后,加入甲醇0.9 mL,涡旋3 min,于15 600 r/min离心8 min,吸取上层有机相于40 ℃水浴以氮气流吹干。残渣以0.3%甲酸200 μL溶解,涡旋3 min后于15 600 r/min离心8 min,取上清液4 μL,进行LC-MS/MS分析。 2.3 试验人员选择 12名健康受试者,男女各半,6名男性受试者年龄(35.3±2.5)岁,体重(65.3±2.3)kg;6名女性受试者年龄(37.3±2.3)岁,体重(54.4±1.4) kg。经体检证明肝、肾功能正常,心电图正常,均符合受试者入选条件。所有受试者自愿参加试验并签署知情同意书,试验方案经第四军医大学第一附属医院药物临床试验伦理委员会批准。受试者于试验前1周和试验期间禁止吸烟、饮酒或含药物、酒精的饮料;在试验前两周及试验期间未服用其他任何药物,试验期间统一饮食。 2.4 血样的采集 12名健康受试者依次进行TDF胶囊低(300 mg)剂量的单、多次给药,高剂量(600 mg)单次给药和低剂量饮食影响单次给药的药代动力学试验。 试验共分3个阶段进行,第1阶段:低剂量(300 mg)单次给药药代动力学试验。受试者于试验前1天进入Ⅰ期临床试验监护病房,禁食10 h,于次日早晨空腹口服受试制剂,用温开水250 mL送服,4 h后进食统一标准餐。于给药前(0 h)及给药后0.17,0.33,0.5,0.75,1,1.5,2,3,4,6,8,12,24,48,72 h 经前臂静脉取血4 mL。随后进行300 mg多次给药药代动力学试验,于每日晨8点口服受试制剂1粒(300 mg),用温开水250 mL送服,给药后1 h可以给予早餐,连续服药7 d。受试者分别于连续给药第5～7天早上服药前采血,第7天服药后0.17,0.33,0.5,0.75,1,1.5,2,3,4,6,8,12,24,48,72 h经前臂静脉取血4 mL。第2阶段:高剂量(600 mg)单次给药药代动力学试验。除给药剂量外,试验过程同低剂量单次给药药代动力学试验。第3阶段:低剂量饮食对药代动力学参数影响试验。受试者于试验当日上午8点统一进食高脂早餐,高脂早餐采用高脂肪、高热量饮食配方,包括老北京鸡肉卷1个(180 g)、鸡蛋2个(100 g)、油15 g和牛奶250 mL。进食时间不超过30 min,在进餐开始30 min后口服TDF胶囊1粒(300 mg)。采血时间点同低剂量单次给药药代动力学试验。各阶段之间设置清洗期为2周。 采集的血样立即离心(4 000 r/min,5 min),分取上层血浆,于-20 ℃保存待测。运输时将血浆样品放入保温箱中,保温箱中加入适量干冰,低于-20 ℃ 转运。 用LC-MS/MS测定血浆中TDF的浓度,采用DAS 2.0软件计算药代动力学参数,对主要药代动力学参数采用SPSS 11.5软件进行统计学分析。 3 3.1 稳定性结果与分析 本试验条件下,替诺福韦和内标的保留时间分别为2.4和2.7 min左右,内源性物质不干扰替诺福韦和内标的测定。 配制含替诺福韦质量浓度为2.026～1 519 ng/mL的系列标准含药血浆,按“2.2”项下方法处理并进行LC-MS/MS分析,记录替诺福韦峰面积 考察血浆于室温放置12 h、反复冻融3次(-20 ℃)和长期冰冻70 d(-20 ℃)条件下的稳定性。结果表明,血浆样品在各条件下的稳定性良