DB37T 667-2007饲料中喹乙醇的测定 液相色谱质谱联用法.pdf

ICS 65.120B20 DB37山东省地國方标准DB37/T 667—2007饲料中喹乙醇的测定液相色谱质谱联用法Determination of olaquindox in feeds by LC-MS2007-03-09发布2007-05-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 6672007前言本标准的附录A、附录B均为资料性附录，本标准由山东省畜牧办公室提出。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省饲料监察所、农业部饲料效价与安全监督检验测试中心（北京），本标准主要起草人：案萌、杨文军、汤文利、任爱删、孙延军， DB37/T 6672007饲料中喹乙醇的测定液相色谱质谱联用法1范围本标准规定了用高效液相色谱-质谱联用（LC-MS）测定饲料中喹乙醇的方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中喹乙醇的测定。本标准高效液相色谱的最低定量限为1mg/kg，质谱确证限为1mg/kg2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3原理饲料样品中的喹乙醇用甲醇溶液提取，过滤后用反相液相色谱柱分离，紫外检测器检测，外标法定量。并采用质谱检测器以唯乙醇的质量色谱峰保留时间和特征离子进行确证，4试剂除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂。水符合GB/T6682一级水的规定。4.1甲醇，色谱纯。4.2乙酸溶液，体积分数是0.1%。4.3碳酸钾。4.4提取液：甲醇+水=5+95.4. 5高效液相色谱流动相：甲醇（4.1）+水，采用二元梯度洗脱。4. 6液质联用流动相：甲醇（4.1）+乙酸溶液（4.2），采用二元梯度洗脱。4. 7淋洗液1：盐酸[c(HC1)=0.1mo1/L]，移取8.33mL盐酸至1000mL容量瓶中，定容。4.8淋洗液2：盐酸［c(HC1)=0.02mo1/L]，移取200ml淋洗液1（4.7）至1000mL容量瓶中，定容4.9淋洗液3：甲醇（4.1）+水=5+95。4.10洗脱液：甲醇（4.1）+水=40+60.4. 11喹乙醇标准液4.11.1喹乙醇标准贮备液称取喹乙醇标准品0.050g，精确到0.1mg（含量≥99.6%），于50ml棕色容量瓶中，加入适量洗脱液（4.10），超声15min溶解，冷却至室温后定容，摇勾，贮存于-18℃冰箱中避光保存，有效期为个月。4.11.2哇乙醇标准工作液准确移取适量标准储备液（4.11.1）于容量瓶中，用洗脱液（4.10）定容，依次配制成0.1μg/mL、1.0μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL的标准工作溶液。现用现配。5仪器1 DB37/T1高效液相色谱仪：具紫外检测器。5.2离子阱质谱仪5. 3离心机：3500r/min.5. 4具塞塑料离心管：100mL.5. 5固相萃取小柱：HLB3CC60mg。5. 6超声波振端器，5. 7固相萃取仪。5. 8恒温振荡器。6试样的制备按GB/T20195规定执行。分析步7. 1提取称取约5g试样，精确到0.1mg，于具塞锥形瓶中，加入0.5g碳酸钾（4.3），加入50.00mL提取液（4.4），具塞置入恒温振荡器中，避光振荡45min（振荡速度110r/min）。提取液在3500r/min下离心10min，上清液经滤纸过滤后保留滤液A，用于固相萃取净化。7. 2HLB小柱的活化依次用2ml甲醇（4.1）和2mlL水对HLB小柱(5.5)进行活化。7. 3净化将混匀的滤液A（7.1）2mL加入活化好的HLB小柱（7.2），分别用3mL淋洗液2（4.8）、淋洗液1（4.7）和淋洗液3（4.9）淋洗小柱，并将小柱吹干。最后用2.00mL洗脱液（4.10）洗脱，收集洗脱液，摇勾，过0.2μm滤膜后待测。对于含喹乙醇较高的试样，调整洗脱液（4.10）用量，使试样溶液中喹乙醇最终浓度为5.0μg/mL-10.0μg/mL。旋涡混匀，过0.2μm微孔滤膜，待测7.4测定7.4.1色谱参考条件色谱柱:Cs柱，250mmX4.6mm，id，5μm，或性能类似分析柱。柱温：室温。检测器：紫外检测器，检测波长260nml流动相：按表1执行表1液相色谱流动相梯度洗脱程序时间，nin水，%甲醇，%08515 ~8515 1030 1430 0218 8515 25Stop流速：1mL/min.进样体积：20μL。N DB37/T 667—200