YC_T 421-2011烟用添加剂中邻氨基苯甲酸肉桂酯的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65. 160YCX 85备案号：34769—2012中华人民共和国烟草行业标准YC/T 421--2011高效液相色谱法Determination of cinnamyl anthranilate in tobacco additives--High performance liquid chromatographic method2011-12-26 发布2012-01-15实施国家烟草专卖局发布 YC/T 421—2011前言本标准按照GB/T 1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承识别这些专利的责任。本标准由国家烟草专卖局提出。本标准由全国烟草标准化技术委员会烟用材料分技术委员会（SAC/TC144/SC8)归口。限责任公司、广东中烟工业有限责任公司。本标准主要起草人：蒋健、周国俊、高阳、肖卫强、王昇、余晶晶、吴达、王申、黄翼飞、周塔、刘建华、王韵。 YC/T 421--2011高效液相色谱法1范围本标准规定了烟用添加剂（香精和料液）中邻氨基苯甲酸肉桂酯的测定方法高效液相色谱法。本标准适用于烟用添加剂(香精和料液)中邻氨基苯甲酸肉桂酯的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注月期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法YC/T145.10烟用香精　抽样3原理样品中的邻氨基苯甲酸肉桂酯经水、乙醇、1，2-丙二醇的混合萃取剂溶解萃取后，用带荧光检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。4试剂与材料4.1　水,符合 GB/T 6682 中一级水的要求。4.2乙腈，色谱纯。4.3乙醇,分析纯。4.4邻氨基苯甲酸肉桂酯,纯度≥99%。4.51,2-丙二醇,分析纯。4.7 标准溶液4.7.1标准储备溶液准确称取20 mg（精确至 0.1mg）邻氨基苯甲酸肉桂酯（4.4），用萃取溶剂（4.6)溶解并移入200 mL容量瓶中，定容至刻度并摇匀。标准储备溶液在0℃～4℃避光环境下保存,有效期为1个月。4.7.2标准工作溶液根据需要配制合适浓度的邻氨基苯甲酸肉桂酯标准工作溶液。推荐如下配制方法：将标准储备浴液(4.7.1)以萃取溶剂(4.6)逐级稀释得到系列标准工作溶液，配制示例如表 1。即配即用。 YC/T 421-—2011表 1系列标准工作溶液配制溶液初始浓度量取体积定容终体积标准溶液终浓度系列标准工作溶液μg/mLmLmLμg/mL6 #100110105 #1051054 #5410 23 #251012 #15100. 51#0. 54100. 25仪器设备及条件5.1高效液相色谱仪，配置荧光检测器。液相色谱柱：C1：色谱柱，规格：250mm（长度）X4.6mm（内径），填料粒度：5.0μm。高效液相色谱条件：以下分析条件可供参考，采用其他条件应验证其适用性。流动相 A:水;流动相B:乙腈;柱温：35℃;-流速:1.0 mL/min;进样体积：10μL；梯度洗脱程序见表2;检测器检测波长，入x（激发波长）为342nm，入em（发射波长）为413nm;分析时间约为46min。表 2 梯度洗脱程序回盘ABmin%65953670304670305.2分析天平,感量0.1 mg。5.3振荡器,最大振荡频率不低于200 r/min。5.4有机相微膜过滤器，配0.45μm有机滤膜。5.5各种规格的移液管、移液枪、容量瓶和具塞锥形瓶。2 YC/T 421—20116取样按照YC/T145.10抽取样品。7 分析步骤7.1样品前处理准确称取0.5 g(精确至0.000 1g)样品于 25mL具塞锥形瓶中，加入 5 mL萃取溶剂（4.6），于150r/min转速下振荡萃取10 min，摇匀后转移至10 mL容量瓶，分别用约1mL萃取溶剂（4.6)清洗锥形瓶三次,将清洗溶剂转移至容量瓶中，并用萃取溶剂(4.6)定容至刻度，摇匀后静置，用0.45 μm滤膜（5.4)过滤，滤液待高效液相色谱分析。对于不溶于萃取溶剂的样品，准确称取0.5g（精确至0.0001g)样品于25mL具塞锥形瓶中，加人10mlL萃取溶剂（4.6），于150r/min转速下振荡萃取10min，静置后取澄清液经0.45μm滤膜（5.4)过滤后待高效液相色谱分析。若待测试样溶液的浓度超出标准工作曲线的浓度范围，则对样品前处理适当调整后重新测定。7.2标准工作曲线制作标准工作曲线，工作曲线线性相关系数R≥0.999。每次试验应制作标准工作曲线，每20次样品测定后应加入一个中等浓度的标准溶液，如果测得的值与原值相差超过5%，则应重新进行标准工作曲线的制作。标准工作溶