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四、基因工程的基本操作 2、运载体的构建 3、目的基因导入受体细胞 1、目的基因的获取 4、目的基因的检测与鉴定 第二十八页，共五十四页，2022年，8月28日 PCR技术 在生物体外复制DNA片段的核酸合成技术 原理： 目的： 前提： 过程： 扩增目的基因 DNA双链复制 有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。 DNA模板 DNA解链 引物结合到互补DNA（DNA聚合酶） 第二十九页，共五十四页，2022年，8月28日 第三十页，共五十四页，2022年，8月28日 目的基因与运载体结合 带目的基因的DNA 质粒与目的基因黏性末端相同 带目的基因的重组质粒 DNA连接酶 质粒 相同限制酶切割 DNA重组 第三十一页，共五十四页，2022年，8月28日 2、运载体的构建 第三十二页，共五十四页，2022年，8月28日 3、目的基因导入受体细胞 （1）将目的基因导入植物细胞 （2）将目的基因导入动物细胞 （3）将目的基因导入微生物细胞 常用农杆菌转化法 常用显微注射法 常用大肠杆菌转化 体细胞 受精卵 用Ca2＋处理细胞 第三十三页，共五十四页，2022年，8月28日 （1）将目的基因导入植物细胞 第三十四页，共五十四页，2022年，8月28日 4、目的基因的检测与鉴定 DNA mRNA 蛋白质 特性（抗虫或抗病） 活性比较 分子水平 个体水平 DNA分子杂交技术 分子杂交技术 抗原－抗体杂交 抗 虫或抗病的接种实验 与天然产品比较 第三十五页，共五十四页，2022年，8月28日 DNA分子杂交技术 第三十六页，共五十四页，2022年，8月28日 DNA分子杂交技术 原理： 工具： 碱基互补配对原则 基因探针 现象： 杂交带 第三十七页，共五十四页，2022年，8月28日 现有一长度为1000碱基对(by）的DNA分子，用限制性核酸内切酶Eco R1酶切后得到的DNA分子仍是1000 by，用Kpn1单独酶切得到400 by和600 by两种长度的DNA分 子，用EcoRI,Kpnl同时酶切后得到200 by和600 by两种长度的DNA分子。该DNA分子的酶切图谱正确的是D 第三十八页，共五十四页，2022年，8月28日 第一页，共五十四页，2022年，8月28日 一、DNA的结构 　观察，思考： DNA分子中，外侧由什么连接而成？ 内侧是什么？ 两条链之间碱基的连接有什么规律？ 构成DNA的两条链有怎样的关系？ 第二页，共五十四页，2022年，8月28日 定向基因改造设想 设想一 能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？ 能否让细菌“吐出”蚕丝？ 设想二 能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物？ 设想三 经过多年的努力，科学家于20世纪70年代创立了可以定向改造生物的新技术 —— 基因工程。 第三页，共五十四页，2022年，8月28日 基因工程 第四页，共五十四页，2022年，8月28日 简述基因工程的概念 举例说出基因工程的工具 简述基因工程的一般过程与技术 本课聚焦: 第五页，共五十四页，2022年，8月28日 一、基因工程的诞生和发展 理论： DNA是遗传物质的证明 DNA双螺旋结构和中心法则的确立 遗传密码的破译 技术： 基因转移载体的发现 工具酶的发现 DNA合成和测序技术的发明 DNA体外重组的实现 重组DNA表达实验的成功 第一例转基因动物的问世 PCR技术的发明 第六页，共五十四页，2022年，8月28日 原 理： 操作水平： 结 果： 目的基因 供体细胞 受体细胞 基因重组 DNA分子水平 定向地改造生物的遗传性状：按照人们的愿望，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 二、基因工程的概念 手 段： 体外DNA重组和转基因技术。 第七页，共五十四页，2022年，8月28日 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 重组DNA 导入 形成 第八页，共五十四页，2022年，8月28日 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 形成重组DNA 关键步骤三： 重组DNA导入受体(棉花)细胞 第九页，共五十四页，2022年，8月28日 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ 关键步骤一的工具： 关键步骤二的工具： 关键步骤三的工具： 分子手术刀—限制性内切酶 分子缝合针—DNA连接酶 分子运输车—运载体 第十页，共五十四页，2022年，8月28日 EcoliI限制酶 三、基因操作的工具