DB37_T 3816-2019畜禽肌肉中肌苷酸含量测定　高效液相色谱法.pdf

ICS 67. 050x 04DB37山 東东省地方标准DB 37/T 3816—2019畜禽肌肉中肌苷酸含量测定高效液相色谱法Determination of inosine acid content in livestock and poultry musclehighperformance liquid chromatography2019-12-24发布2020-01-24实施山东省市场监督管理局发布 DB37/T 3816—2019前言本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草，本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所。本标准主要起草人：呼红梅、朱荣生、王意平、赵雪艳、王怀中、王继英、王诚、葡海朝、程立坤、韩红、成建国、林松、郭建风、刘畅、唐伟静、孙洁、胡顺营、莫贞峰、时再再。I DB37/T 3816—2019蓄禽肌肉中肌苷酸含量测定高效液相色谱法1范围本标准规定了畜禽肌肉中肌苷酸含量测定。本标准适用于畜禽肌肉中肌苷酸含量的测定。本方法检出限为0.05mg/g，定量限为0.20mg/g2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T9695.19肉与肉制品取样方法3原理试样中的肌者酸经5%高氯酸落液（4.8）提取，再与0.5mo1/L氢氧化钠落液（4.9）发生反应生成化学状态稳定的肌苷酸钠，采用高效液相色谱（紫外检测器)测定，外标法定量。试剂或材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂4.1水：GB/T 6682，—级水.4.2甲酸铵。4.3高氯酸。4.4氢氧化钠。4.5肌苷酸标准品：纯度≥98.0%。4.6甲醇：色谱纯。4.7甲酸铵缓冲溶液（50mmo1/L，pH6.5）：准确称取3.15g甲酸铵（4.2）于烧杯，加500mL水(4. 1),用0.5mo1/L氢氧化钠溶液（4.9）调至pH6.5，定容至1000mL。用前0.45μm滤膜过滤，超声水浴脱气20min。4.8高氯酸溶液（5%）：准确移取高氧酸（4.3）5mL，加95mL水（4.1）4.9氢氧化钠落液（0.5mo1/L）：将氢氧化钠（4.4）配成饱和落液，密闭放置至落液清亮，用塑料管虹吸，准确移取26ml上清液于1000mL水（4.1）中。4.10肌苷酸标准储备液（1mg/mL）：准确称取肌苷酸标准品（4.5）15.31mg（精确至0.01g），水（4.1）定容至10mL4.11肌苷酸标准系列工作溶液：准确移取1mg/ml肌苷酸标准储备液（4.10）2、4、8、10、12、14、16mL，水（4.1）定容至100 mL，即为0.02、0.04、0.08、0.10、0.12、0.14、0.16mg/mL的肌苷酸标准系列工作液。1 DB37/T 3816—20194. 12微孔滤膜：0.45μm无机系。5仪器和设备5. 1高效液相色谱仪：配备紫外检测仪。5.2离心机：转速不低于4000rpm5.3高速组织勾浆机：转速不低于8000rpm。5. 4分析天平：感量0.1mg和0.01mg各一台。5. 5磁力拌器。6样品按照GBT9695.19中取样方法，采集有代表性的样品20g左右，搅碎、均质，并转入塑料自封袋中，-20℃保存备用。7测定步骤7.1提取平行做2份试验。称取1g~2g搅碎、均质的肌肉（精确至0.0001g），置于50nL离心管中，准确加入20mL预冷的5%高氯酸落液（4.8），高速组织匀浆机8000rpm匀浆1min后，转入50mL容量瓶，5%高氯酸（4.8）定容。移取20mL4000rpm离心3min，准确移取上清液10mL，用0.5mo1/L氢氧化钠溶液（4.9）调pH值至6.5，转入50ml容量瓶用水（4.1）定容。用0.45μm滤膜（4.12）过滤备用。7. 2液相色谱参考条件色谱柱：柱长150mm，粒径5μⅢ，内径4.6m，或其他效果等同的C18柱柱温：30℃。紫外检测波长：254nm。流动相：甲酸铵缓冲溶液（4.10）+甲醇=95+5。流速：1.0 ml/min进样量：10μL.运行时间：10min。7.3测定7.3.1上机测定肌苷酸标准系列工作液（4.11）和提取溶液（7.1）上机测定。在上述色谱条件下，肌苷酸标准溶液和样品肌者酸提取液色谱图见附录A。7.3.2定量以肌苷酸的浓度为横坐标，肌苷酸标准系列工作液（4.11）的色谱峰面积（响应值）为纵坐标，绘制标准曲线，其相关系数不低于0.99。试样中待测物的响应值应在标准系列工作液测定的线性范围内（相差不