NY_T 2377-2013葡萄病毒检测技术规范.pdf

ICS 65.020B 16NY中华人民共和国农业行业标NY/T 2377—2013葡萄病毒检测技术规范Code of practice for the detection of grapevine viruses2014-01-01实施2013-09-10 发布M中华人民共和国农业部-发布 NY/T2377—2013前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由农业部种植业管理司提出本标准由全国果品标准化技术委员会（SAC/TC510）归口。本标准起草单位：中国农业科学院果树研究所、农业部果品及苗木质量监督检验测试中心（兴城）。本标准主要起草人：董雅凤、张尊平、范旭东、任芳、刘凤之、聂继云。一 NY/T 2377—2013葡萄病毒检测技术规范1范围本标准规定了葡萄主要病毒检测技术的术语和定义、检测对象、检测方法和检测结果的判定。本标准适用于葡萄接穗、插条、苗木、组培苗、田间植株中主要葡萄病毒的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件NY/T1843葡萄无病毒母本树和苗木3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1葡萄无性繁殖材料grapevineasexual propagationmaterials用于嫁接繁殖葡萄苗木的接穗或扦插繁殖葡萄苗木的插条3. 2葡萄苗木grapevinenurserystock采用品种接穗和砧木嫁接繁育的葡萄嫁接苗，以及通过扦插、组织培养等方法繁育的葡萄自根苗。3.3葡萄组培苗grapevine nursery stock fromtissue culture指利用葡萄外殖体，在无菌和适宜的人工条件下，培育的完整植株。3. 4指示植物indicatorplant是指被某种或某类病毒侵染后，在适宜的环境条件下，能够表现典型症状的寄主植物3.5酶联免疫吸附测定enzyme-linked immunosorbentassay（ELISA）在固相支持物上（酶联板)包被病毒特异性抗体，加人待测样品后，再用酶标记的病毒抗体进行免疫识别，最后通过酶与底物的颜色反应检测病毒是否存在的一种血清学检测方法。3. 6逆转录聚合酶链式反应reversetranscription-polymerasechainreaction（RT-PCR）利用逆转录酶将RNΛ逆转录为cDNA，再以此为模板并以耐热DNA聚合酶和-一对引物（与待测目标核酸分子序列同源的DNA片段）通过高温（DNA分子变性）和低温（引物和目标核酸分子复性并被耐热DNA聚合酶延伸)交替循环扩增待测目标核酸分子的方法。4检测对象4.1葡萄扇叶病毒(Grapevinefanleaf virus,GFLV)4.2葡萄卷叶相关病毒1(Grapevineleafroll-associatedvirus1,GLRaV1)4.3葡萄卷叶相关病毒 2(Grapevine leafroll-associated virus 2,GLRaV-2)1 NY/T2377—2013葡萄卷叶相关病毒3(Grapevineleafroll-associatedvirus3,GLRaV-3)4.4葡萄卷叶相关病毒4(Grapevineleafroll-associatedvirus4,GLRaV-4)4.54.6个葡萄卷叶相关病毒5（Grapevineleafroll-associatedvirus5,GLRaV-5)葡萄卷叶相关病毒7(Grapevineleafroll-associatedvirus7,GLRaV-7)4.714.81葡萄病毒A(GrapevinevirusA,GVA)4.9葡萄病毒B(GrapevinevirusB,GVB)4.10葡萄斑点病毒（Grapevinefleckvirus,GFkV)4.11沙地葡萄茎痘病毒（Grapevine rupestris stem pitting-associated virus，GRSPaV)5检测方法5.1指示植物嫁接法5.1.1葡萄扇叶病毒、葡萄卷叶相关病毒、葡萄病毒Λ和葡萄斑点病毒均可采用指示植物进行检测。5.1.2采用绿枝嫁接和硬枝嫁接方法，将待检样品嫁接到指示植物，或将指示植物嫁接到待检样品上，每个组合重复3株～5株。5.1.3生长季节定期观察指示植物的症状表现，具体操作方法和指示植物症状表现参见附录A。5.2酶联免疫吸附法(ELISA)5.2.1葡萄扇叶病毒，葡萄卷叶相关病毒1，葡萄卷叶相关病毒2，葡萄卷叶相关病毒3，葡萄卷叶相关病毒5，葡萄卷叶相关病毒7，葡萄病毒Λ，葡萄病毒B和葡萄斑点病毒等能够获得稳定可靠抗血清的病毒，可采用ELISA方法进行检测。5.2.2适