SN_T 2661-2010进出口动物源性食品中阿维菌素残留量的检测方法 酶联免疫吸附法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2661—2010进出口动物源性食品中阿维菌素残留量的检测方法‧酶联免疫吸附法Determination of avermectin residues in foodstuffs of animalorigin for import and exportEnzyme linked immunosorbent assay2010-11-01发布2011-05-01实施中华人民共和国1X发布国家质量监督检验检疫总局玛防 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准进出口动物源性食品中阿维菌素残留量的检测方法酶联免疫吸附法SN/T 2661—2010*中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www. spc. net. cn电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷印张 1.25　字数 29 千字开本 880×1230 1/16 2011年4月第一次印刷2011年4月第一版印数 1—1 600*书号：155066·2-21837 SN/T 2661--2010前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国安徽出人境检验检疫局。本标准主要起草人：郑文杰、刘伟、赵卫东、贺艳、刘烜、张海滨、朱梦栩、蔡国瑞、万宇平、汪善良、陈炜琳、王硕。 SN/T 2661—2010进出口动物源性食品中阿维菌素残留量的检测方法酶联免疫吸附法1 范围本标准规定了动物源性食品中阿维菌素药物残留量的酶联免疫吸附测定方法。本标准适用于猪肉、牛肉、鸡肉羊肉等肉制品、鱼和虾等水产品中阿维菌素残留量的筛选检测。2方法提要高脂肪样品采用过柱法。其方法提要简述如下：用乙腈提取样品中阿维菌素，无水硫酸钠去除提取液中水分，离心后取乙相过氧化铝柱，洗脱液氮气吹干后，复溶于复溶工作液，用间接竞争性酶联免疫法进行检测。低脂肪样品采用非过柱法,除提取液不过氧化铝柱以外，其他步骤与过柱法一致。3试剂和材料除另有要求外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水3.1 甲醇。3.2 乙腈。3.3正已烷。3.4无水硫酸钠。碱性氧化铝柱 sep-park vac 12cc(2:g)或相当者。3.5阿维菌素酶联免疫试剂盒(参见附录 A)。3.6仪器和设备4 4.1均质器。4.2 离心机。4.3 旋涡混匀器。4.4酶标仪。4.5氮吹仪。4.6温育培养箱。单道微量加样器:50 μL,100μL,20 μL～200 μL 可调,200 μL～1000 μL 可调。4.7多通道微量加样器：50μL～250μL可调。4.8样品制备与保存5 从全部原始样品取出有代表性样品约500g，用组织捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。将试样存放于一18℃冰箱中保存。 SN/T 2661--20106测定步骤6.1提取6.1.1高脂肪样品（如鳗鱼等)一一过柱法用均质器均质组织样本，称取3g(精确至0.1g)均质后的样品，置50mL聚苯乙烯离心管中，加入9mL乙腈、3mL正已烷,涡旋混匀10 min。加人3g无水硫酸钠，涡旋混匀10min后，15℃ 4000 r/min离心10 min。去除上层正已烷,取下层 4 mL提取液备用。取碱性氧化铝 sep-park vac 12cc(2g)柱，称取 3g无水硫酸钠平铺在滤板上，加人10mL乙腈洗柱。加人4mL下层提取液，开始收集滤液，待提取液流干后，再加人4mL乙腈清洗柱子，合并洗液和滤液至50mL聚苯乙烯离心管中，于50℃～60℃水浴氮气流下吹干。取1mL稀释后复溶工作液（见6.2.1)溶解残渣，用旋涡混匀器涡旋混匀1min，超声波溶解10 min，再涡动 1 min。取出 100 μL溶解后的样品液，加人100 μL稀释后复溶工作液（见6.2.1），涡旋混匀30s充分混合，取20μL用于测定。6.1.2低脂肪样品（如虾、肌肉等)非过柱法用均质器均质组织样本，称取3g(精确到0.1g)均质物至50mL聚苯乙烯离心管中，加入9mL乙腈、3mL正已烷，涡旋混匀10min。15℃4 000 r/min离心10min。直接吸取下层液1mL至10mL干净的玻璃试管中，于50℃～60℃水浴氮气流下吹干。取1mL复溶工作液溶解干燥的残留物，用旋涡混合器涡旋混匀1min，超声波溶解10 min，再涡旋混匀1min。取出 100 μL溶解后的样品液，加人100μL稀释后复溶工作液（见6.2.1），涡旋混匀30s充分混合，取20μL用于测定。6.2酶联免疫法检测6.2.1试剂的配制提供的复溶工