SN_T 1694-2011马媾疫检疫技术规范.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1694—2011代替 SN/T 1694—2006马購疫检疫技术规范Quarantine protocol for dourine2011-09-09 发布2012-04-01实施由华人民共和国发布0国家质量监督检验检疫总局数码防份 SN/T 1694—2011前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准代替了SN/T1694一2006《马疫微量补体结合试验操作规程》。本标准与 SN/T1694—2006相比，主要技术变化如下：增加了临床检查；增加了间接荧光抗体试验；增加了酶联免疫吸附试验。本标准与OIE《陆生动物诊断试验与疫苗手册》(2010修订版)第2.5.3章一致性程度为非等效。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。本标准主要起草人：朱来华、郑小龙、贾赞、简中友、肖西志、邓明俊、岳志芹、梁成珠、辛学谦、谭乐义、王群、孙涛、赵玉然、王宫璞。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T 1694--2006。 SN/T 1694-2011马疫检疫技术规范1 范围本标准规定了马疫的临床检查、补体结合试验、间接荧光抗体试验和酶联免疫吸附试验等诊断技术。本标准适用于马嫌疫的诊断和检疫。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3临床检查参见附录 A。4血清学鉴定技术4.1补体结合试验4.1.1材料准备4.1. 1. 1被检血清:见附录 B。4.1. 1.2绵羊红细胞：见附录 B。4. 1. 1.3补体:冻干品。马嫌疫阴性血清、阳性血清。马疫补体结合抗原。溶血素：冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。实验用水应符合 GB/T 6682要求。阿氏液:见附录 C。稀释液:巴比妥缓冲液见附录C。4.1.2预备试验（溶血素、补体、抗原等效价测定)溶血素效价测定(通常一个月左右测定一次)4. 1. 2. 1. 1 溶血素的稀释先将溶血素稀释成1：100的基础液（如：溶血素以石炭酸防腐时,取0.1mL加9.9mL稀释液，如以甘油为保存液,则取0.2mL加9.8mL稀释液，混合均匀），再按表1进一步稀释。1 SN/T 1694—2011表1溶血素稀释法稀释倍数(1：×)要素mL5001 0001 5002 0002 5003 5003 0004 0005 0000.11：100溶血素0.10.1稀释液0.80. 91. 41. 92. 42. 93. 94. 93. 4全量1.01. 01. 52. 02. 53. 03.54.05. 0.2溶血素效价测定按表2测定溶血素效价。表 2溶血素效价测定法（总体积125μL)稀释倍数(1：×)对照要素1 : 500μL5001 0001500120002 50013 0003 5004 000 5 000补体红细胞溶血素25稀释的溶血素252525252525252525稀释液5010050505050505050507575251：20补体252525252525252525：252.5%红细胞悬液2525252525252525252525温育37℃水浴 30 min按表2操作结束后，取出微量反应板，对照不出现溶血现象。微量反应板轻微振动混匀后，540nm读取OD值,与标准比色孔（见附录D)比较，观察溶血度，记录结果。.3溶血素效价确定能使25μL的2.5%红细胞悬液在37℃水浴箱内30min出现完全溶血（100%）的最小溶血素量，称为一个溶血素单位，或溶血素效价。测定补体、抗原和做正式试验时，溶血素的用量为2个溶血素单位或工作量。.4制备致敏红细胞悬液按测定的溶血素效价稀释溶血素至2个标准单位，缓慢加人到等量的2.5%绵羊红细胞悬浮液中，混合均匀，置37℃水浴箱中温育20min，即制备成致敏红细胞悬液。补体效价测定每次进行补体结合反应试验，应于当日测定补体效价。先用稀释液，将补体做1：20稀释，然后按表 3进行操作。2 SN/T 1694-2011表 3补体效价测定（总体积125μL）孔号对照要素μL23510 1146789155102025 304045501：20补体354035 25 105030201550稀释液加稀释液2525252525 25 25温育37℃水浴30min505050505050致敏红细胞5050505050温育37℃水浴 30 min按表3操作结束后，取出微量反应板，对照不出现溶血现象。微量反应板轻微振动混匀后，5