SN_T 4141-2015畜及畜产品中糖皮质激素残留量检测方法 酶联免疫法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4141-2015畜及畜产品中糖皮质激素残留量检测方法酉酶联免疫法Determination of glucocorticoid residues in livestock and livestockproducts--Enzyme-linked immunosorbent assay2015-02-09 发布2015-09-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局刮涂层查真伪 SN/T 4141—2015前言本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：韩伟、王赢、袁辰刚、朱坚1. SN/T 4141--2015畜及畜产品中糖皮质激素残留量检测方法酶联免疫法1范围本标准规定了畜及畜产品中地塞米松、泼尼松龙、氟地塞米松、异氟泼尼龙、倍他米松、去炎松和氟米龙等糖皮质激素残留量的抽样、制样和酶联免疫测定方法。本标准适用于畜产品（牛、猪、羊等内脏组织与肌肉组织）、牛奶和动物尿液中地塞米松、泼尼松龙、氟地塞米松、异氟泼尼龙、倍他米松、去炎松和氟米龙等糖皮质激素残留量的筛选检验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3试样的缩分和保存3.1试样缩分3.1.1组织样品：从全部样品（包括牛奶）中取有代表性样品，去除脂肪、充分绞碎、混勾，用四分法缩分出不少于500g试样。3.1.2动物尿样：从饲养现场收集动物尿液，充分混匀、澄清后，装人清洁密闭容器，试样不少于50 ml.3.2样品容器样品应装于合适的清洁干燥容器中，以保持样品的完整性和可追溯性。可采用聚乙烯塑料容器，玻璃容器等惰性材料容器（不允许使用橡胶容器）盛装样品，然后再放人较大的干净容器中密封装运3.3样品封识应在每个样品容器的外表贴上标签，标签上注明样品名、样品编号、生产批号、抽样日期、抽样地点、堆位、抽样人员，并由抽样人员或官方人员加封。3.4样品保存3.4.1抽样后样品应立即在一18℃以下冷冻保存，0～5℃条件下48h内送达实验室。3.4.2在抽样和制样过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。4测定方法4.1原理本方法的测定基础是竞争性酶联免疫反应。微孔板上包被有绵羊抗兔IgG的抗体，加入特异性抗 SN/T 4141—2015体（免抗地塞米松抗体）、酶标记泼尼松龙、地塞米松标准品或样品提取液后，特异性抗体与包被的绵羊抗兔IgG抗体结合，同时游离糖皮质激素和酶标记泼尼松龙竞争性的与特异性抗体结合。通过洗涤除去未结合的糖皮质激素的酶标记泼尼松龙，然后加人底物显色，用酶标仪测定吸光度，根据吸光度值得出试样中糖皮质激素的含量。4.2试剂和材料除去另外说明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.2.1糖皮质激素酶联免疫测定试剂盒：应能满足本方法测定低限要求，参见附录A和附录B。4.2.2乙酸乙酯。4.2.3正已烷。4.2.4甲醇。 mol/I 氢氧化钠溶液。4.2.6半对数坐标纸。4.2.7地塞米松标准品。4.3仪器和设备4.3.1酶标仪。4.3.2均质器。4.3.3离心机。4.3.4氮气挥发器。4.3.5振荡器。4.3.6微量加样器:10 μL～100 μl,20 μL～200 μL。4.3.7微量多通道加样器：10μL～100 μL。4.4分析步骤4.4.1提取组织样品(肌肉，肝脏，肾等)称取组织试料2g±0.05g于50ml.离心管中，加乙酸乙酯15mL，旋涡混合，15℃3000g离心10 min，移取乙酸乙酯层。于离心残渣中加0.1 mol/L氢氧化钠溶液 10 mL，混匀，加乙酸乙酯15 mL，旋涡振荡15min，移取乙酸乙酯层。合并两次提取液后，吹蒸干（置40℃氮气流中），用2mL样品稀释缓冲液溶解供测定用。最后样品稀释倍数为1.0。牛奶取牛奶试料2mL±0.05ml于50 mL离心管中,加乙酸乙酯20 ml，旋涡混合15min,15℃3000g离心10 min，移取乙酸乙酯层，置 40℃氮气流中吹干，用2ml样品稀释缓冲液，振荡溶解供测定用。最后样品稀释倍数为1.0动物尿样取待测动物尿样2ml，15℃3000g离心10min,取0.5mL澄清尿液，用样品稀释缓冲液稀释至1 mI，混合均匀供测定用。最后样品稀释倍数为 2.0。2 SN/T 4141--20154.4.22测定条件操作条件所有操作应在室温下（20℃～24℃)进行，糖皮质激素酶联免疫测定试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温(20℃