SNT 2497.12-2010进出口危险化学品安全试验方法 第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2497.12—2010进出口危险化学品安全试验方法第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验Test method of import and export dangerous chemicals-Part 12 :Single cell gel electrophoresis (SCGE) assay2010-09-16实施2010-03-02发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 2497.12--2010言前SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分：第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外 DNA合成(UDS)试验;第2 部分:空斑形成细胞(PFC)试验;第3部分：大型遥繁殖试验；-第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；第5部分：睾丸细胞UDS试验；第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第7部分：小鼠耳肿胀试验；第8部分：胸窝淋巴结试验；第9部分：血清溶血素测定试验;第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验；第11部分：种系突变试验；第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验；第13部分：荧光原位杂交试验；第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验;第15部分：PCR-SSCP实验；第16部分：Western-Blot实验；第17部分：哺乳动物行为毒理学试验；-第18部分：DNA加合物的检测方法；：第19部分:Northern Blot实验;-第20部分：Bradford法测定蛋白质含量；-第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验；第22部分:DNA 的 Tm 值测定方法；第23部分：细胞器的分离实验方法；第24部分：细胞免疫功能体外检测方法；第25部分：体液免疫功能试验；第26部分：巨噬细胞功能试验；第27部分：流式细胞术检测凋亡;第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用;第29部分：生化需氧量（BOD)测定。本部分为SN/T2497系列标准的第12部分。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国湖南出人境检验检疫局。本部分主要起草人：张园、王利兵、王华、赵琢、韩伟、熊中强。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN/T 2497.12—2010进出口危险化学品安全试验方法第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验1范围SN/T2497的本部分规定了进出口危险化学品的单细胞凝胶电泳分析试验的试验方法、试验步骤、试验结果和结果报告。本部分适用于进出口危险化学品单细胞凝胶电泳分析试验。2　规范性引用文件下列文件中的条款通过SN/T2497的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的文件，其最新版本适用于本部分。GB14924.1实验动物配合饲料通用质量标准GB14925实验动物环境及实施3术语、定义和缩略语3.1　术语和定义下列术语和定义适用于本部分。3.1.1裂解 lysis采用高盐和去垢剂破除细胞膜，去除蛋白，是DNA片段在电场力的作用下能够从细胞核迁出。3. 1. 2解旋unwindingDNA为双螺旋结构,在解旋液的作用下，双链 DNA变性，成为单链。3.2缩略语下列缩略语适用于本部分。3.2. 1DMSO Dimethylsulfoxide 二甲基亚砜3.2.2DNA Deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸3.2.3EB Ethidium bromide 溴化乙锭3.2.4PBS磷酸盐缓冲液3.2.5PI Propidium iodide 碘化丙啶4·原理DNA分子在断裂剂作用下出现链断裂,将单个核细胞包埋于琼脂糖凝胶中，细胞经裂解和解旋后 SN/T 2497.12—2010电泳,在电场作用下,DNA片断向阳极迁移,移动的距离与 DNA 片断的相对分子质量和电荷数相关，经荧光染料染色后在荧光显微镜下可观察到彗星样图像，根据慧星拖尾长度及荧光强度可进行DNA损伤分析。5主要试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水为灭菌去离子水或超纯水。5.1 PBS:在 800 mL蒸馏水中溶解 8 g NaCl,0.2 g KC1,1.44 g Na²HPO4 和 0.24 g KH²PO4,用 HC1调节溶液的 pH值至 7.4,加水定容至1 L,在1.034×105 Pa(151 bf/in²)高压下灭菌20 min，保存于室温0.7%正常熔点凝胶（PBS配制）5.20.7%低熔点凝胶(PBS配制)5.31%正常熔点凝胶（PBS配制）5.4碱性裂解液:2.5 mol/L NaCl;i0o-mmol