SN_T 3196-2012水产品中致病性弧菌检测 全自动病原菌检测系统筛选法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3196---2012水产品中致病性弧菌检测全自动病原菌检测系统筛选法Determination of pathogenic vibrio in aguatic product-- Automatic detection system for screening pathogenic bacteria2012-05-07发布2012-11-16 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准水产品中致病性弧菌检测全自动病原菌检测系统筛选法SN/T 3196—2012*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100013）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010址 www.spc. net. cn中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×12300　1/16　印张 0.5　字数 9千字2012年10月第一版　2012年10月第一次印刷印数 1—1 600*书号：155066·2-24080 SN/T 3196—2012言前本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局、中华人民共和国湛江出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国宁波出入境检验检疫局。本标准主要起草人：邵碧英、郑晶、陈彬、黄晓蓉、陈春梅、劳华军、张体银、吴谦。 SN/T 3196-2012水产品中致病性弧菌检测全自动病原菌检测系统筛选法1范围本标准规定了水产品中霍乱弧菌、副溶血性弧菌和创伤弧菌的筛选方法。本标准适用于水产品中霍乱弧菌、副溶血性弧菌和创伤弧菌的快速筛选检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 4789.7食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测SN/T 0173进出口食品中副溶血性弧菌检验方法SN/T1022进出口食品中霍乱弧菌检验方法FDA/BAMChapter９美国食品药品管理局微生物学分析手册　第９章弧菌NMKLNo.156北欧食品协会　食品中致病性弧菌定性和定量检测方法3缩略语下列缩略语适用于本文件。3.1DNA(deoxyribonuleic acid):脱氧核糖核酸3.2 PCR(polymerase chain reaction）:聚合酶链式反应4原理BAX全自动病原菌检测系统是应用PCR技术来检测病原菌。反应所需的引物、DNA聚合酶和脱氧核苷酸等被合并成为一个稳定、干燥的片剂，并装人 PCR管中。每个 PCR试剂片都包含有荧光染料，该染料能结合双链DNA，并且受光激发后发出荧光信号。在检测过程中，BAX系统通过测量荧光信号的变化，分析测量数据，从而进行结果判定。5 试剂5.1实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。5.2碱性蛋白陈水（APW）,参见 A.1。5.3BAX系统霍乱弧菌/副溶血性弧菌/创伤弧菌的PCR检测试剂盒，2℃～8℃放置，参见A.2。1 SN/T 3196--20126仪器与设备6.1恒温培养箱：:35℃±2℃。6.2冰箱:2℃～8℃。6.3均质器。6.4天平：感量0.1g。6.5超净工作台。6.6微量可调移液器及枪头：50μL,200μL。6.7BAX全自动病原菌检测系统7检测程序致病性弧菌全自动病原菌检测系统筛选法的检测程序见图-125g检样+225ml:APW增菌液 35℃±2℃培养18 h～20 h提取细菌DNA模板BAX金自动病原菌检测系统检测一阴性结果阳性结果传统方法确认结果报告图1致病性弧菌全自动病原菌检测系统筛选法的检测程序8操作步骤8.1样品制备、增菌8.1.1称取检样25g，加人装有225mL碱性蛋白陈水增菌液的广口瓶或均质袋内。固体样品应用均质器在8000r/min～10000r/min条件下均质，或用剪刀充分剪碎。8.1.235 ℃±2℃培养18 h～20 h。2 SN/T 3196—20128.2细菌 DNA模板的提取8.2.1打开加热槽，分别加热至37℃±2℃和95℃±3℃，检查冷藏过夜的冷却槽（4℃）。8.2.2在每个溶菌管中加人200μL配制好的溶菌试剂（12mL裂解缓冲液中加150μL蛋白酶），加入5 μL增菌液,盖上盖子。8.2.3将溶菌管放在37℃±2℃加热槽中，加热20min，再将溶菌管转移到9