动态滴定法测定脂肪酶的活力.pdfVIP

GB/T ××××—×××× 附录 A （资料性） 动态滴定法测定脂肪酶的活力 A.1 范围 本方法适用于测定含有或混有脂肪酶/酯酶样品中的脂肪酶活力。 特殊的脂肪酶或特殊的成品制剂在样品制备阶段需采用特殊的稳定或抽提手段以保证检测到所有 的脂肪酶活力。 A.2 原理 脂肪酶水解甘油三酯生成脂肪酸，使反应体系的pH不断下降。通过连续加入碱的方法保持反应体系 的 pH 恒定。碱滴定的速率与酶活力成比例。 注1.酯酶的存在会使检测的脂肪酶的活力增加。蛋白酶的存在降解脂肪酶，从而使检测到的脂肪酶的活力减小。 注2.洗涤剂的存在会严重影响本方法。依不同洗涤剂的类型和浓度不同，这种影响表现为从完全抑制到激活。 注3.酶会附着在塑料上，因此应用玻璃器皿溶解稀释，同时也应用玻璃器皿滴定。在溶液的转移中如果时间很短， 且选择适当的塑料材质，可以使用塑料移液枪头。 A.2.1 反应式 H COOC-CH CH CH CH OH 2 2 2 3 2  脂肪酶  HCOOC-CH CH CH ⎯⎯⎯ HCOOC-CH CH CH + CH CH CH COOH 2 2 3 2 2 3 3 2 2   H COOC-CH CH CH H COOC-CH CH CH 2 2 2 3 2 2 2 3 三丁酸甘油酯 二丁酸甘油酯 丁酸 A.2.2 反应条件 ——温度：30℃1℃。 ——pH ：7.00 。 ——底物浓度：0.16 mol/L的三丁酸甘油酯。 ——反应时间：至少1.5 min （只有线性反应区用于计算斜率）。 A.2.3 分析范围 样品的分析范围是0.2 u/mL～4.0 u/mL 。如果可能，所有样品应在1.5 u/mL～4.0 u/mL 的范围内被 分析。 A.2.4 检测限 对于液体样品检测限为 20 u/g ，相当于 2.5 g 样品溶解在 10 mL 溶液中，然后再稀释 25 倍。对 于固体样品检测限为 50 u/g ，相当于 1.0 g 样品溶解在 10 mL 溶液中，然后再稀释 25 倍。 A.3 仪器和设备 A.3.1 具有动态滴定 （pH-stat ）功能的滴定仪。 A.3.2 乳化器。 6 GB/T ××××—×××× A.3.3 恒温水浴：精度 0.2C 。 A.3.4 温度计：精度 0.2C 。 A.3.5 自动移液器。 A.4 试剂 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。 A.4.1 三丁酸甘油酯 （C H O ） 15 26 6 A.4.2 氯化钠 （NaCl ） A.4.3 磷酸二氢钾 （KH2PO4 ） A.4.4 阿拉伯胶 A.4.5 甘氨酸 （H2NCH2COOH ） A.4.6 甘油 [HOCH2CH(OH)CH2OH] A.4.7 氢氧化钠片剂 （NaOH ） A.4.8 电极校正液 （pH 7.0 ） A.4.9 电极校正液 （pH 4.01 ）