WST 39-1996尿中硫氰酸盐的砒啶-巴比妥酸分光光度测定方法.pdf

中华人民共和国卫生行业标准尿中硫氰酸盐的吡啶WS/T39-1996巴比妥酸分光光度测定方法Urine-Determination of thiocyanate-Pyridinebarbituric acid spectrophotometric method1主题内容与适用范围本标准规定了尿中硫氰酸盐的分光光度测定方法。本法最低检测浓度为1mg/L。本标准适用于正常人和接触无机氰化物和有机氰化物的工人尿中硫氰酸盐的测定。2原理在微酸性条件下，尿中硫氰酸盐和氯胺T反应生成氯化氰。它使吡啶环裂开，产生戊烯二醛。戊烯二醛与巴比妥酸作用，生成紫红色染料，其色度与硫氰酸盐含量成正比，在波长580nm处比色定量。3仪器3.1分光光度计，10mm比色杯。3.2吸量管，0.5,2.0,5.0,10.0mL。3.3容量瓶，100mL。3.4硬质玻璃瓶或聚乙烯塑料瓶，50mL或100mL。3.5尿比重计。4 试剂本标准所用试剂除另有说明者外，均为分析纯试剂。4.1实验用水，蒸馏水或具有同等纯度的去离子水。4.2盐酸溶液，1+3。4.3硫氰酸钾，优级纯。4.4磷酸盐缓冲液(pH=7)：溶解2.79g磷酸二氢钾(KH,PO.)和4.14g磷酸氢二钠(Na2HPO4)于少量水中，并稀释至1L。4.5氯胺T溶液，10g/L。4.6吡啶-巴比妥酸溶液：溶解0.18g巴比妥酸于3mL吡啶及10mL盐酸溶液（4.2)中，用水稀释至100mL（临用前配制）。4.7硫氰酸盐标准溶液：溶解0.1673g已烘干的硫氰酸钾（KSCN)于少量水中，用水稀释至100mL，此溶液1mL=1mgSCN-，存放普通冰箱中，可使用1个月。将此溶液用水分别稀释为（A)1mL=2μgSCN-和(B)1mL=10 μgSCN-的标准应用液（当日配制)。4.8质控样：用加标的模拟尿、接触者混合尿或加标的正常人混合尿作质控样。1997-05-01实施中华人民共和国卫生部1996-10-14批准 WS/T 39—19965采样、运输和保存用玻璃瓶或聚乙烯瓶取班后尿，于4h内分析。6分析步骤6.1样品处理样品不需处理，直接按6.3条进行测定。6.2标准曲线的绘制。6.2.1取7只10mL比色管，按下表配制标准管。硫氰酸盐标准管的配制管号031?456标准应用液A，mL000.100. 2500000000.10标准应用液B,mL0. 150. 2000. 10. 10. 1 0. 10. 10. 1非接触者尿,mL000. 2 0. 51. 01. 52. 0SCN-含量,μg1）选取SCN-浓度低的尿6.2.2分别加入2mL缓冲液（4.4），混匀，加入0.2mL氯胺T溶液，立即盖塞，混匀。放置5min，加入2mL吡啶-巴比妥酸溶液，混匀，于室温低于25℃时，置于25℃恒温箱中放置20min，加水至5mL，混匀。于波长580nm处，用10mm比色杯，以试剂空白（0号管）为参比，测量吸光度。6.2.3将2～6号管的吸光度减去1号管的吸光度，以SCN含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。6.3样品测定6.3.1吸取0.1mL新鲜尿样于10mL比色管中。6.3.2按6.2.2条操作，测量吸光度，从标准曲线上查出硫氰酸盐的含量。在测定前后及每测定10个样品后，测定一次质控样。7 计算7.1按式(1)计算尿样换算成标准比重(1.020)下的浓度校正系数k。1.020 -1.000k二:(1)实测比重-1.0007.2按式(2)计算尿中硫氰酸盐的浓度。X=×k(2)式中：X尿中硫氰酸盐的浓度，mg/L;由标准曲线上查得的硫氰酸盐含量，ug；mV-分析时所取尿样体积，mL。8说明8.1本法检测限为1mg/L（空白值的3倍标准差），测定范围·0.1～2.0μg，精密度：CV=3.25%～6.73%（SCN-含量为0.2，0.5，1.0，1.5，2.0μg，n=6)；准确度：接触氰化物工人尿样加标回收率为97.1%~99.8%（加标量为0.2,0.5,1.0μg，n=6)。8.2本法测定的尿样必须是新鲜的，放4℃冰箱第二天后测定结果偏低。故取班后次尿样，4h内进 WS/T 39—1996行测定，夏季运输时最好冷藏。8.3显色温度应保持在25℃以上。吡啶-巴比妥酸溶液应于临用前配制，放置时间过长会影响吸光度。8.4氰化物进入人体后，大部分与体内的硫结合为SCN-，从尿中排出，一小部分仍以CN-的形式排出。CN-也同样显色，故测出的结果是CN-和SCN²的总量。8.5质控样选加标的模拟尿时可考查准确度和精密度。选用接触者尿或加标正常尿时可考查精密度。但人尿不易久存。模拟尿只含人尿中的大量成分。附加说明：本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由广东省职业病防治院负责起草。本标准主要起草人周素华、吴翠榕。本标准由卫