SN_T 3312-2012结核分枝杆菌γ-干扰素体外检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3312—2012结核分枝杆菌-干扰素体外检测方法Interferon- release assay for the diagnosis ofMycobacterium tuberculosis in vitro2012~12~12 发布2013-07-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3312—2012言前本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国厦门出人境检验检疫局。本标准主要起草人：杨坤宇、熊焕昌、李庶甘、陈帆、陈慧、张毅、陈彬、苏水宽、贺骥。1 SN/T 3312—2012结核分枝杆菌-干扰素体外检测方法1范围本标准规定了国境口岸出人境人员感染结核分枝杆菌的-于扰素体外检测方法，包括检测对象、标本采集和处理、检测程序、结果判定和报告本标准适用于对国境口岸出人境人员感染结核分枝杆菌的实验室检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡注日期的引肝文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB19489实验室　生物安全通用要求3术语和定义下列术语和定义适用于文件3.1结核分枝杆菌Mycobacterium tuberculosis播，可累及全身各个器宫，尤以肺结引起结核病（tuberculosis)的病原菌。结核病压要通过空气核最为多见。结核分枝杆菌复合群主要包括：结核分枝杆菌（M.tubrculosis）、牛分枝杆菌（M.bouis）、非洲分枝杆菌（M.africanum）和由鼠分枝秆菌(M.microti）临床上最常见的是结核分枝杆菌和牛分枝杆菌。结核分枝杆菌多数为杆状，稍弯曲，菌体冤度g.3umn0.GAm,菌体长度0.5 μm～8 μm,多数在1.5μm～3.5μm。少数菌体较长者可呈规螺旋。染色良好的结核分枝杆菌菌体内能发现着色较深的异染颗粒。3.2-干扰素 interferon-?脊椎动物受多种因素（如微生物)诱导产生的→种抗病疑蛋白质。-干扰素可影响细胞的运动和免疫过程,也可干扰多种病毒的复制。3.3结核分枝杆菌 -干扰素体外释放试验TB-interferon-release assay结核分枝杆菌感染人体后会刺激外周血细胞特异性地分泌-干扰素，结核分枝杆菌-干扰素体外释放试验就是利用这一现象发展起来的一一种评估结核分枝杆菌感染的体外检测方法。选用结核分枝杆菌的特异性抗原ESAT-6 和CFP-10体外刺激结核分枝杆菌感染者（包括临床结核患者和潜伏性结核感染者)的外周血细胞，使其T淋巴细胞增殖并释放-干扰素等细胞因子,再通过检测特异性释放的-干扰素，判断是否存在结核分枝杆菌感染。这种方法对于涂阳肺结核、涂阴肺结核以及肺外结核的检测均具有很好的效果，且不受卡介苗和环境中常见其他分支杆菌的干扰。4生物安全防护要求实验室结构和设施、安全操作规范、安全设备及个体防护应符合GB19489中二级生物安全防护实验室的要求。1 SN/T 3312—20125检测对象5.1人出境旅客及国际航行交通工具员工。5.2在华外籍人员及港、澳、台胞。5.3国境口岸食品、饮用水及公共场所从业人员。5.4其他申请检测的人员。6材料与试剂6.1仪器和器材6.1.137℃恒温箱。6.1.2小型台式离心机。6.1.3自动洗板机。6.1.4含波长450nm/610nm的酶标仪。6.1.5Ⅱ级生物安全柜。6.1.6一次性采血针。6.1.7真空抗凝采血管(肝素钠)。6. 1.8可调式微量加样器及配套带滤芯吸头。6.1.991.5 mL离心管。6.2 试剂测试培养管、本底对照培养管、阳性对照培养管、标准品、酶标板、酶标试剂、样品稀释液、标准品稀释液、浓缩洗涤液、显色液、终止液等检测所需的各种试剂的准备参见附录A。7样品的采集、处理与转运7.1样品的采集和处理使用真空抗凝采血管抽取≥4 mL静脉血，立刻颠倒混匀6次以上，使抗凝剂充分溶解。在采血管上标注被采集人员姓名、采集时间和标本编号。7.2样品的转运采集全血标本后，在4 h内,在室温(16℃～28℃)条件下由专人运送至实验室。8实验室检测8.1刺激培养以下检测过程和结果判定是以北京万泰生物药业股份有限公司生产的结核分枝杆菌-干扰素体外释放定量检测试剂盒为例的，其他等效市售商品试剂盒也可采用，操作应严格按试剂盒说明书要求1）北京万泰生物药业股份有限公司的结核分枝杆菌-干扰素体外释放定量检测试剂盒（TB-IGRA)是适合的实例。给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对这一产品的认可。2 SN/T 3312--2012进行。在采集全血标本后的4 h 内，分别将1mL的