抗体的应用及选择.pptVIP

第一页，共三十四页，2022年，8月28日 凯基生物是专业从事生物试剂研发、生产、销售和技术服务的国有公司 凯基生物现具有四条产品线：生命科学通用工具库、医学研究工具库、药物发现和开发工具库、核质与核信号研究工具库，五千余种产品，上万种品种规格供客户选择 第二页，共三十四页，2022年，8月28日 抗体 (Ab):是B 细胞受抗原刺激后，分化为浆细胞合成并分泌的一类能与相应抗原特异结合的球蛋白。 第三页，共三十四页，2022年，8月28日 抗体的应用 医疗领域： 诊断： 已知抗体查未知抗原；血型、乙肝、SARS、肿瘤相关抗原等 已知抗原查未知抗体；HIV、伤寒、自身免疫病等 预防： 应急预防（破伤风，Rh不合的新生儿溶血等） 治疗： 感染、抗移植排斥、抗炎、抗肿瘤 科研： western blot ELISA FACS IHC IP … 第四页，共三十四页，2022年，8月28日 Western blot 第五页，共三十四页，2022年，8月28日 Primary antibody 选择？ 第六页，共三十四页，2022年，8月28日 Secondary antibody 酶标二抗： 辣根过氧化酶（HRP) 碱性磷酸酶（AP) 葡萄糖氧化酶（GOT) 种属性:兔(与一抗来源相同） 来源：山羊（不能与抗原来源相同） 第七页，共三十四页，2022年，8月28日 ELISA 第八页，共三十四页，2022年，8月28日 与western blot 不同点 二抗：必须能与抗原结合 但是不能与一抗（包被抗体）结合 抗原：小鼠 一抗：兔来源 二抗：不能是兔来源的 第九页，共三十四页，2022年，8月28日 第十页，共三十四页，2022年，8月28日 第十一页，共三十四页，2022年，8月28日 免疫组化 第十二页，共三十四页，2022年，8月28日 传统方法 第十三页，共三十四页，2022年，8月28日 即用型快捷免疫组化? 聚合物: 辣根过氧化物酶标羊抗鼠、兔（一抗） 碱性磷酸酶酶标抗鼠、兔（一抗） 第十四页，共三十四页，2022年，8月28日 免疫组织化学的应用 1.确定细胞类型 2.确定细胞类型 3.确定细胞类型 4.确定细胞类型 5.确定肿瘤分期 6.寻找感染病因 ….. 第十五页，共三十四页，2022年，8月28日 FACS 液流系统：将细胞单个压入流动室 激光发射器 发出所需要的波长的激光 前向散射光检测器 光学滤镜 侧向散射光检测器 第十六页，共三十四页，2022年，8月28日 目前流式仪可以检测的类别 细菌 浮游生物 红细胞 淋巴细胞 中性粒细胞 单核细胞 DM：1um ——15um 第十七页，共三十四页，2022年，8月28日 荧光标记法 直接染色法： 省时，一步染色 特异性强 可以同时进行多种颜色的染色 间接染色法： 荧光强度往往比较强 荧光颜色可以随时更换 耗时 非特异性染色干扰实验结果，特别是阳性率低的时候。 Biotin染色： 特异性较强的荧光识别 灵活选择颜色 只能使用一种带生物素的抗体 在全血中会有非特异性染色 第十八页，共三十四页，2022年，8月28日 荧光抗体的介绍 用各种方法将单克隆抗体和流式仪能够检测到的荧光蛋白结合在一起就是流式操作中所用的荧光抗体 第十九页，共三十四页，2022年，8月28日 流式实验流程介绍 1，将荧光抗体和细胞一起培养 2，抗体结合到细胞表面所对应的特殊抗原上 3，过流式细胞仪的时候，在激发光的照射下，抗体的荧光部分发出荧光 4，抗体发出的发射光被流式仪所收集 第二十页，共三十四页，2022年，8月28日 根据目前可见的三种激发光分 蓝色激发光405nm 绿色激发光488nm 红色激发光635nm 第二十一页，共三十四页，2022年，8月28日 第二十二页，共三十四页，2022年，8月28日 细胞结构 细胞大小 细胞粒度 细胞表面面积 核浆比例 DNA含量与细胞周期 RNA含量 蛋白质含量 染色体分析 细胞功能 细胞表面/胞浆/核的特异性抗原 细胞活性 细胞内细胞因子 酶活性 激素结合位点 细胞受体 细胞凋亡 在上述信号基础上的细胞分选 流式细胞术的细胞学应用 第二十三页，共三十四页，2022年，8月28日 流式细胞仪的临床应用 HIV免疫分型，CD4绝对计数 白血病和淋巴瘤的免疫分型 肿瘤的细胞周期和倍体分析 网织红细胞计数 细胞移植的交叉配型和免疫状态监测 干细胞计数 残量白血病细胞检查 HLA-B27检查 血小板功能及相关疾病 第二十四页，共三十四页，2022年，8月28日