SNT 1772-2006进出口粮谷中玉米赤霉烯酮的测定 免疫亲合柱—液相色谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1772—2006进出口粮谷中玉米赤霉烯酮的测定免疫亲和柱-液相色谱法Determination of zearalenone in cereals forimport and export-Immunoaffinity column andliquid chromatographic method2006-04-25发布2006-11-15 实施中华人民共和国发布A国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 1772—2006言前本标准的附录 A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：隋凯、李军、卫锋、宋文斌、林维宣、田苗。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。1 SN/T 1772—2006进出口粮谷中玉米赤霉烯酮的测定免疫亲和柱-液相色谱法1 范围本标准规定了进出口粮谷中玉米赤霉烯酮检验的制样和免疫亲和柱-液相色谱测定方法。本标准适用于进出口玉米、小麦中玉米赤霉烯酮的检验。2制样2.1试样制备将样品按四分法缩分至1kg，全部磨碎并通过20目筛，混勾，均分成两份作为试样。分别装人洁净的盛样容器内，密封，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生待测物含量的变化。2.2试样保存将试样于5℃以下避光保存。3测定方法3.1方法提要试样中的玉米赤霉烯酮用乙腈-水提取后，提取液经免疫亲和柱净化。用配有荧光检测器的液相色谱仪进行测定,外标法定量。3.2 试剂与材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相当的去离子水。3.2.1甲醇:HPLC级。3.2.2 乙腈:HPLC级。3.2.3乙腈+水(9+1):取90mL乙腈加10mL水。3.2.4氯化钠。3.2.5玉米赤霉烯酮(zearalenone)标准品：纯度≥98%。3.2.6玉米赤霉烯酮标溶液：准确称取适量的玉米赤霉烯酮标准品，用乙腈配成浓度为0.1mg/mL的标准储备液。根据需要用流动相稀释成适当浓度的标准工作液。3.3仪器与设备3.3.1液相色谱仪配有荧光检测器。3. 3.2粉碎机。3.3.3高速均质器。3.3. 4氮吹仪。3.3.5空气压力泵。3.3.6玻璃纤维滤纸。3.3.7玻璃注射器:20 mL。3.3.8免疫亲和柱:玉米赤霉烯酮免疫亲和柱。3.3.9微量注射器：100μL。3.4测定步骤3.4.1提取称取试样约40g（精确到0.1g)于250mL具塞锥形瓶中，加人4g氯化钠及100mL乙腈十水1 SN/T 1772—2006（9十1），以均质器高速搅拌提取2min。定量滤纸过滤，移取10.0mL滤液并加入40.0mL水稀释混匀，以玻璃纤维滤纸过滤1次～2次，至滤液澄清，随即进行免疫亲和柱净化操作。3.4.2净化将免疫亲和柱连接于 20mL玻璃注射器下。准确移取 10.0mL(相当于 0.8g样品1）上述提取滤液注人玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约每秒1滴～2滴流速缓慢通过免疫亲和柱,直至 2 mL～3 mL空气通过柱体。以 5 mL水淋洗柱子 1 次,弃去全部流出液，并使2 mL～3mL空气通过柱体。推确加入.1.5_mL.HPLC.级甲醇洗脱,流速为 1 mL/min～2 mL/min，收集洗脱液于玻璃试管中，再用氮气于55℃以下吹于。用1.0mL流动相[b)］溶解残渣，溶液过0.45 μm滤膜后供液相色谱测定。3.4.3测定液相色谱条件色谱柱:Nova-Pak Cig柱(4 μm),150 mm mm(内径)或相当者;a）3.9b）流动相：乙腈+水+甲醇（46+46+8)，c）流速:1.0 mL/min;d)检测波长：激发波长274nmz发射波长440nm;e）进样量：50 μL。色谱测定根据样液中玉米赤霉稀酮含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中玉米赤霉烯酮响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样进行测定。在上述色谱条件下，标准品色谱图参见附录A中图A.空白试验除不加试样外,均按上述步骤进行。3.4.5结果计算和表述用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中玉米赤霉烯酮的含量;计算结果需将空白值扣除。AXcXV.(1 )AsXm式中:X一一试样中玉米赤霉烯酮的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);样液中玉米赤霉烯酮的峰面积；A-As-标准工作溶液中玉米赤霉烯酮的峰面积;-c——标准工作溶液中玉米赤霉烯酮的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL);样液最终定容体积，单位为毫升（mL)；V.最终样液所代表的试样量，单位为克(g)。m4i测定低限、回收率4.1测定低限本方法的测定低限为0.005mg/kg。4.2回收率4.2.1玉米中玉