SN_T 4849.4-2017出口食品及饮料中常见小浆果成分的检测方法 实时荧光PCR法 第4部分：桑葚.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4849.4—2017出口食品及饮料中常见小浆果成分的检测方法实时荧光PCR法一第4部分：桑葚Identification of the ingredients of common small berry fruitsin food and juice for export-Real-time PCR method-Part 4 : Mulberry2017-07-21 发布2018-03-01 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局KDcr31、刮涂层查真伪 SN/T 4849.4—2017前言SN/T4849《出口食品及饮料中常见小浆果成分的检测方法实时荧光PCR法》系列标准共分为6部分：第 1部分：蓝莓；第2部分树莓；第3部分：黑加仑；-第 4 部分:桑甚;一第5部分：蔓越莓和蓝莓；第6部分：猕猴桃。本部分为SN/T4849的第4部分。本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国阿勒泰出人境检验检疫局。本部分主要起草人：黄文胜、陈颖、邓婷婷、吴亚君、杨艳歌、李飞、张九凯、韩建勋、王斌。1 SN/T 4849.4—2017出口食品及饮料中常见小浆果成分的检测方法　实时荧光PCR法第4部分：桑葚1范围SN/T4849的本部分规定了出口食品及饮料中桑葚成分的检测方法实时荧光PCR法。本部分适用于鲜果、冷冻果、蜜饯、鲜榨果汁、果肉型果汁、果干、果酱等以桑葚为原辅料的初加工食品及饮料中桑葚成分的定性检测（清汁及果酒除外）。本部分所规定方法的最低检出限（LOD)为1%（体积比）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403—一2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义、缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1小浆果 small berry fruits浆果是指由一个子房或联合其他花器发育成的柔软多汁的肉质单果，由一个或几个心皮形成。小浆果则泛指果实较小、多汁的一类浆果。3.1.2桑葚mulberry尊麻目桑科桑属植物果实，为聚花果，由多数卵圆形小核果集合而成，呈长圆形，黄棕色、棕红色至暗紫色，（部分品种成熟后呈乳白色）。拉丁文名：Morusalba L。3.22缩略语下列缩略语适用于本文件。DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuleic acid)PCR:聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)Ct值：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数dNTP：脱氧核苷酸三磷酸（deoxyribonuleoside triphosphate)dATP:脱氧腺苷三磷酸（deoxyadenosine triphosphate)dCTP:脱氧胞苷三磷酸(deoxycytidine triphosphate) SN/T 4849.4--2017dGTP:脱氧鸟苷三磷酸(deoxyguanosine triphosphate)dTTP:脱氧胸苷三磷酸(deoxythymidine triphosphate)UNG:尿嘧啶 N-糖基化酶(uracil N-glycosylase)CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrithylammonium bromide)Tris:三羟甲基氨基甲烷Tris(Hydroxymethyl)aminomethane]lEDTA:乙二胺四乙酸(Ethylene diaminetetraacetic acid)Taq :水生栖热菌(Thermus aquaticus)OD:光度密度(optical density)4　方法提要果实样品直接粉碎离心，果汁样品直接离心，提取沉淀DNA，果干、果酱、蜜饯先用蒸馏水清洗再提取DNA。以桑葚果实为阳性对照，以其他水果 DNA 为阴性对照,无菌水作为空白对照。使用特异性引物探针进行实时荧光PCR扩增，通过实时荧光信号曲线判定是否存在桑葚成分。5试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。5.1检测用引物和探针：桑葚成分扩增引物和探针、内参照（显花植物NADH基因）引物和探针详见表1。桑葚引物扩增的靶标序列参见附录A。表 1桑葚序列引物探针扩增片物种名称引物/探针序列（5-→3）靶基