NY_T 2859-2015主要农作物品种真实性SSR分子标记检测 普通小麦.pdf

ICS 65.020.01B 04NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2859—2015主要农作物品种真实性SSR分子标记检测普通小麦Variety genuineness testing of main crops with SSR markers-Wheat (Triticum aestivum L.)2015-10-09发布2015-12-01实施中华人民共和国农业部-发布 NY/T 2859--2015目次前言1范围2规范性引用文件3术语和定义4缩略语5总则.6检测方案7仪器设备、试剂和溶液配制，8真实性检测程序9结果计算与表示10结果报告10附录A（规范性附录）溶液配制11附录B(资料性附录)引物分组信息1.3附录C(规范性附录)等位变异扩增片段信息附录D(资料性附录)参照样品名单..: NY/T 2859—2015言前本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本标准的某些内容有可能涉及专利。本标准的发布机构不应承担识别这些专利的责任。本标准由农业部种子管理局提出。本标准由全国农作物种子标准化技术委员会（SAC/TC37)归口。本标准起草单位：北京市农林科学院北京杂交小麦工程技术研究中心、全国农业技术推广服务中心、北京市种子管理站。本标准主要起草人：赵昌平、支巨振、邱军、庞斌双、刘丽华、王立新、谷铁城、刘丰泽、吴明生、刘阳娜、张立平、张风廷、李宏博、赵海艳。I NY/T 2859--2015主要农作物品种真实性SSR分子标记检测普通小麦1范围本标准规定了利用SSR分子标记法进行普通小麦（TriticumaestivumL.）常规品种真实性检测的原则、检测方案、检测程序和结果报告。本标准适用于普通小麦常规品种真实性验证和品种真实性身份鉴定，不适用于实质性派生品种(EDV)和转基因品种的鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T3543.1农作物种子检验规程总则GB/T3543.2农作物种子检验规程扦样GB/T3543.5农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1品种真实性验证varietyverification与其对应品种名称的标准样品比较，检测证实供检样品品种名称与标注是否相符。3.2品种真实性身份鉴定varietyidentificatior经SSR分子标记检测并通过审定品种SSR指纹数据比对平台（见3.4)筛查比较，确定供检样品的真实品种名称。3.3标准样品standardsample国家指定机构保存的经认定代表品种特征特性的实物种子样品。3. 4SSR指纹数据比对平台SSRfingerprintblastplatform采用SSR标记的标准化方法对品种标准样品的等位变异进行检测，并运用计算机数据库技术和网络信息技术所构建的审定品种分子数据信息的检索比对载体。3.5参照样品referencecontrolsample用于校准供检样品SSR等位变异已定义扩增产物片段大小的样品。3.6引物primer一条互补结合在模板DNA链上的短单链，能提供3-OH末端作为DNA合成的起始点。延伸合成模板DNA的互补链。1 NY/T2859—20153.7组合引物panel具有不同荧光颜色或相同荧光颜色而扩增片段大小不同、能够组合在一起进行电泳的一组荧光标记引物。3. 8核心引物coreprimer以最少数量的引物最大限度地区分普通小麦品种的一套引物。3. 9扩展引物extendedprimer辅助真实性检测的一套引物。4缩略语下列缩略语适用于本文件。bp:base pair碱基对CTAB:cetyltrimethylammoniumbromide十六烷基三甲基溴化铵DNA：deoxyribonucleic acid脱氧核糖核酸dNTPs:deoxy一ribonucleoside triphosphates脱氧核苷三磷酸PAGE：polyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳PCR:polymerase chain reaction 聚合酶链式反应SDS：sodium dodecyl sulfate十二烷基磺酸钠SSR：simple sequence repeat简单序列重复Taq酶：Taq-DNApolymerase：耐热DNA聚合酶5总则普通小麦的不同品种，其基因组存在着能够世代稳定遗传的简单重复序列（SSR)的重复次数差异。这种差异可以通过从抽取有代表性的供检样品中提取DNA，用SSR引物进行扩增和电泳，从而利用扩增片段大小不同而加以区分品种。