NYT 1678-2008乳与乳制品中蛋白质的测定 双缩脲比色法.pdf

ICS 67.100.10X 16NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1678—2008乳与乳制品中蛋自质的测定双缩脲比色法Determination of protein in milk and dairy productsBiuret spectrophotometry method2008-10-20 发布2008-10-20实施中华人民共和国农业部5发布 NY/T 1678—2008前言本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国农业大学，农业部奶及奶制品质量监督检验测试中心（北京），农业部食品质量监督检验测试中心（上海），农业部乳品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：侯彩云、王加启、刘凤岩、韩奕奕、魏宏阳、刘莹、王旭、牛巍、安瑜、芮闯、孙建平、陈婧。本标准为首次发布。I NY/T 1678--2008乳与乳制品中蛋白质的测定双缩脲比色法1 范围本标准规定了测定乳与乳制品中蛋白质含量的方法。本标准适用于乳与乳制品中蛋白质含量的测定。本方法检出限为5×10-５g/100g。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3原理利用三氯乙酸沉淀样品中的蛋白质，将沉淀物与双缩试剂进行显色，通过分光光度计测定显色液的吸光度值，采用外标法定量，计算样品中蛋白质含量。4试剂与材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂和符合GB/T 6682的二级水。4.1 四氯化碳。4.2酪蛋白标准品(纯度≥99%）。4.310mol/L氢氧化钾溶液：准确称取560g氢氧化钾，加水溶解并定容至1L。4.4250g/L酒石酸钾钠溶液：准确称取250g酒石酸钾钠,加水溶解并定容至1L。4.540g/L硫酸铜溶液：准确称取 40g硫酸铜,加水溶解并定容至1L。4.6　150g/L三氯乙酸溶液：准确称取150g三氯乙酸，加水溶解并定容至1L。4.7双缩脲试剂：将10mol/L氢氧化钾溶液10mL和250g/L酒石酸钾钠溶液20mL加到约800mL蒸馏水中，剧烈搅拌，同时慢慢加入40g/L硫酸铜溶液30mL，定容至1000mL。5仪器和设备5.1天平,感量士0.000 1g。5.2高速冷冻离心机。5.3分光光度计。5.4超声波清洗器。6 测定步骤6.1标准曲线的制备取6支试管,按表1加人酪蛋白标准品和双缩脲试剂，充分混匀。1 NY/T 1678--2008表 1 标准曲线的制作5管号0124350010203040酪蛋白标准品，mg20. 020.020. 0双缩脲试剂,mL20. 020. 020.000. 51. 01. 5蛋白质浓度，mg/mL2. 02. 56.2样品前处理6.2.1固体试样准确称取 0.2g试样,置于 50 mL 离心管中,加入 5mL水。6.2.2液体试样准确称取 1.5g 试样,置于 50 mL离心管中。6.2.3 沉淀和过滤加人150g/L的三氯乙酸溶液5mL，静置10min使蛋白充分沉淀，在10000r/min下离心10min，倾去上清液,经 95%乙醇10mL洗涤。向沉淀中加人四氯化碳2mL和双缩脲试剂20mL，置于超声波清洗器中震荡均匀，使蛋白溶解，静置显色10 min，在10000 r/min下离心20min,取上层清液，待测。6.3蛋白质含量的测定在6.1制备的标准溶液中，以0管调零,540nm下测定各标准溶液的吸光度值，以吸光度值为纵坐标，以表1中的蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。同时测定6.2.3提取的蛋白液的吸光度值，并根据标准曲线的线性回归方程读取制备样品的蛋白浓度c。7结果计算试样中蛋白质含量以质量分数m计，数值以克每百克(g/100g)表示,结果按式(1)计算：2c(1)mmo式中:-100g奶粉中蛋白质的含量，单位为克每百克（g/100g）；m--取样量，单位为克（g）；mo-c试液中蛋白浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL）。注：测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留三位有效数字。8精密度在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。2 L/XN中华人民共和国农业行业标准乳与乳制品中蛋白质的测定双缩脲比色法NY/T 1678--2008***中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼）（邮政编码：100125网址： www. ccap. )北京昌平环球印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销***开本 880mmX1230mm 1/1