NY 882-2004硅酸盐细菌菌种.pdf

ICS 65.080B 10NY中华人民共和国农业行业标准NY 882-2004硅酸盐细菌菌种Silicate-Dissolving bacteria culture2005-01-04发布2005-02-01实施中华人民共和国农业部发布 NY 882—2004前言本标准的附录 A、附录 B、附录 C、附录 D和附录 E为规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：农业部微生物肥料质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：曹凤明、李俊、沈德龙、姜昕、葛一凡。 NY 882—2004硅酸盐细菌菌种1范围本标准规范了农用硅酸盐细菌菌种的特征、要求、检验方法、评价方法以及菌种的纯化、复壮和保藏。本标准适用于农用微生物菌剂和微生物肥料生产中使用的硅酸盐细菌菌种。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。NY/T 798--2004　复合微生物肥料GB/T17419—1998含氨基酸叶面肥料NY/T 301一1995有机肥料速效钾的测定3 术语硅酸盐细菌菌种Silicate-Dissolving Bacteria Culture是指一类在土壤中能通过自身的生命活动,分解硅铝酸盐类矿物,释放钾素营养,改善植物的营养条件,并具备生产应用性能的细菌纯培养物。4菌种特征硅酸盐细菌菌种包括胶质芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus）和土壤芽孢杆菌（Bacillus edaphicus）两个种。4.1细胞形态营养体：粗长杆状,两端钝圆,革兰氏染色反应不定,产生聚β-羟基丁酸盐(PHB)颗粒。在培养基A.1_上（参见附录A)菌体大小为(1.0～1.2）μm×（2.5～7.0）μm,菌体周围有厚英膜。芽孢：壁厚,椭圆形,中生或近端生,芽孢囊不膨大或微膨大。4.2菌落形态在A.1培养基平板上，菌落圆形，无色，隆起，胶质黏稠，透明或半透明，边缘整齐。4.3生物学特征好氧或兼性厌氧生长,水解淀粉,接触酶反应阳性，氧化酶和卵磷脂酶反应阴性,在无氮培养基(参见附录A.2)上生长良好，生长温度10℃～45℃。5 要求！5.1菌种要求纯培养物,无杂菌。5.2硅酸盐细菌菌种技术指标见表1。1 NY 882—2004表 1 硅酸盐细菌菌种技术指标指项目标≥20速效钾相对增加量，%解钾能力≥1.0mg/ L植物激素总量，发酵M50.0代谢游离氨基酸总量，mg/L产物mg/LM500.0有机酸总量，70%耐热能力芽孢存活率，hN60发酵周期，6检验方法6.1菌种纯度检验在适宜培养基上培养，观察菌落和菌体形态,若有杂菌丢弃或对其进行纯化,纯化方法见8.1.2。6.2解钾能力的测定速效钾相对增加量的测定方法见附录B。6.3发酵代谢产物测定6.3.1发酵条件在适宣培养条件下，发酵周期结束后取样测定发酵液中代谢产物的含量。以不接种的发酵培养液作对照。发酵培养基见附录 A.3。6.3.2植物激素的测定见附录 C。6.3.3游离氨基酸的测定见附录 D。6.3.4有机酸的测定见附录E。6.4芽孢存活率测定6.4.1测定方法菌悬液在65℃条件下恒温30min杀死营养体，制成芽孢悬液。芽孢悬液于80℃恒温水浴处理10min,将处理前和处理后的芽孢悬液稀释涂布在适宜培养基上,适宜条件下培养 2 d～4 d,计菌落数。3次重复。活菌数测定方法按NY/T798--2004复合微生物肥料中5.3.2的要求进行。6.4.2芽孢存活率计算按式(1)计算a(%) = nl ×100 ..(1)no式中:芽孢存活率(%）;处理前芽孢悬液的菌落平均数(cfu/mL);no--处理后芽孢悬液的菌落平均数(cfu/mL)。n16.5发酵周期的检验适宜生产条件下，当发酵液中的菌体数量达到108cfu/mL以上且有80%以上的营养体形成芽孢为2 NY 882-2004发酵周期终止。7评价方法7.1菌株符合表1中的各项指标,可以作为优良生产菌株。7.2表1中其他三项符合要求，而发酵代谢产物仅两项达到要求或其中一项达到要求的两倍，也可作为生产菌株。7.3当硅酸盐细菌菌种用做生产液体剂型时,对耐热能力不做要求。8菌种纯化、复壮和保藏8.1菌种分离与纯化8.1.1分离将土壤或其他样品制成菌悬液,稀释后涂布 A.1培养基平板上，适宜条件下培养2d～4 d,挑取符合硅酸盐细菌菌种特征的菌落进行纯化。8.1.2纯化在适宜的培养基上连续划线培养观察,直至菌落形态一致,镜检菌体大小整齐、无杂菌。根据硅酸盐细菌的特征进行菌种确认。8.2复壮菌种生长速度下降、菌体形态出现异常、