SN_T 4351-2015水生动物及其产品中乙烯雌酚、甲孕酮液相芯片检验技术规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4351—2015水生动物及其产品中乙烯雌酚、甲孕酮液相芯片检验技术规范Detection protocol of DES and MPA in aquaticanimals and products with liquichip2015-12-04发布2016-07-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准水生动物及其产品中乙烯雌酚甲孕酮液相芯片检验技术规范SN/T4351—2015*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029)北京市西城区三里河北街16号（100045)总编室：(010址中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×12301/16印张0.75字数18千字2016年8月第一版反2016年8月第一次印刷印数1-1100*书号：155066·2-30373定价16.00元 SN/T4351—2015前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、上海大学。本标准主要起草人：王艳、陈沁、任硕、李小林、林颖、李健、陈政晓。I SN/T4351—2015水生动物及其产品中乙烯雌酚甲孕酮液相芯片检验技术规范1范围本标准规定了水生动物及其产品中乙烯雌酚、甲孕酮的液相芯片检测方法，包括样品处理、液相芯片检测方法、结果判定。本标准适用于水生动物及其产品中乙烯雌酚、甲孕酮的快速筛2规范性引用文件日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括有的修改单）适用于本文件。分析实验室用水规格和试验方GB/T 66823缩略语下列缩略语适用于本文件。MPA甲孕酮（MedroxyprogesteronAceta(DiethylstillDES乙烯雌酚bestrol已的链霉亲和素SAPE藻红蛋白标记R-phycoerythrinconjugate)(Strvidir(Median fluMFI平均荧光强度ceintensity)A仪器设备备）。1)4.1液相芯片系统（Luminex100/200或等效设4.2微孔滤板抽滤器。4.3真空气泵。4.4倒置显微镜。4.5纯水仪。4.6离心机。4.737℃摇床。4.8电子天平：感量0.01g。4.9微量移液器。4.10旋涡振荡仪。4.11血球计数板。由指定单位提供，给出这一信息是为了方便本文件的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具1)有相同的效果，则可使用这些等效产品。1 SN/T4351—20155试验原理本方法基于免疫学抗原抗体特异性反应原理。标准品或样品中的抗原能与荧光微球上偶联的抗原竞争性地结合定量的生物素化抗体，加人SAPE后，通过液相芯片系统读数MFI,MFI与样品中的抗原浓度成反比，从而达到定量测定样品中MPA和DES的目的。6主要试剂和耗材6.1乙酸乙酯。6.2乙腈。6.3正已烷。6.4磷酸二氢钠。6.5磷酸氢二钠。6.6氯化钠。6.7氢氧化钠。6.8氯化钙。6.9牛血清白蛋白。6.10叠氮化钠。6.11吐温-20。6.12生物素化标记试剂盒：BiotinLabelingKit-SH(Pierce)或等效试剂盒²）。6.13微球交联试剂盒：AmineCouplingKit（Bio-Rad）或等效试剂盒²）。6.14DES标准品（纯度99%）。6.15MPA标准品（纯度为98.8%）。6.161-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐(EDC)。6.17N-羟基硫代琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)。6.18SAPE(1 mg/mL)。6.19灭菌双蒸水，本标准所用水应符合GB/T6682中二级水的规格；其他试剂除特殊规定外，均指分析纯试剂。6.20羧基化编码微球。6.2196孔滤板。6.22离心管：50mL。6.23消毒液：10%的次氯酸钠溶液。6.24其他所需缓冲溶液配制及要求见附录A。7抗原偶联编码微球和抗体生物素化7.1MPA偶联微球[以AmineCouplingKit(Bio-Rad)为例，具体步骤参见附录B]，包被好的微球于0℃～4℃避光保存备用，有效期1年。7.2DES偶联微球［以AmineCouplingKit(Bio-Rad)为例，具体步骤参见附录B]，包被好的微球于0℃～4℃避光保存备用，有效期1年。2）由指定单位提供，给出这一信息是为了方便本文件的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。2 SN/T4351—20157