WST 230-2002临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用.pdf

C 50WS中华人民共和国卫生行业标准WS/T 230—2002临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用Guidelines for use of polymerase chain reaction(PCR) technique in clinical diagnosis2002-04-20 发布2002-07-01实施中华人民共和国卫生部•发布 WS/T 230--2002前言聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)是一种在体外特异性扩增靶 DNA序列的技术。其基本过程为模板双链 DNA 的变性、引物与模板 DNA 的退火和在 DNA 聚合酶引导下的链延伸反应三个阶段的多次循环。每一次循环后的扩增产物均可作为下一轮循环的模板，理论上，扩增产物量呈指数形式上升，即经n个循环后,产物量增加到2倍。PCR 操作简单,短时间内在体外可获得数百万个特异靶 DNA序列的拷贝，为临床疾病的诊断、治疗监测和预后评估提供了一种极有帮助的实验室辅助手段。本标准的附录 A、附录 B都是标准的附录。本标准从2002年7月1日起实施。本标准由卫生部医政司提出。本标准由北京大学人民医院肝病研究所负责起草。本标准主要起草人：陶其敏、全文斌、范涛。本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释。 中华人民共和国卫生行业标准临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用WS/T 230—2002Guidelines for use of polymerase chain reaction(PCR) technique in clinical diagnosis1范围本标准规定了临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用准则。本标准适用于各级、各类的医疗、卫生、保健机构应用 PCR技术进行临床诊断。2 定义本标准采用下列定义。2.1 引物 primer与待扩增靶DNA片段两端互补的寡核苷酸，其本质是单链DNA(ssDNA)，,在 DNA 聚合酶的作用下能进行延伸，从而合成新的互补链。2.2 模板 template待扩增的靶 DNA或RNA链，包括人类基因组DNA、质粒 DNA、噬菌体 DNA、cDNA 和 mRNA、扩增后的DNA产物等几乎所有形式的DNA或RNA。2.3 变性 denaturationDNA 或 RNA 由双链转变为单链状态，加热、提高pH或加人甲酰胺、脲等试剂都可使双链 DNA或RNA发生变性。2.4 退火 annealing引物与互补的核苷酸序列在合适的温度下通过氢键形式相互结合的过程。2.5 延伸 extension在合适的条件下，由DNA聚合酶（如：Taq酶)催化引导引物DNA链延伸的合成过程。2.6 污染 contamination由来源于非待测样品的核酸所引起的一个样品、一系列样品或试剂的非特异性扩增或扩增后在产物分析过程中造成的样品之间的污染，污染通常引起假阳性结果。2.7 遗留污染 carry-over contamination同一类靶序列上一次PCR扩增产物对以后扩增反应的后续污染。2.8 内对照 internal control在同一反应混合物体系中与待测靶核酸同时进行扩增反应的已知对照物。2.9 Taq DNA 聚合酶 Taq DNA polymerase一种耐热的 DNA聚合酶,最初是从美国黄石国家公园温泉中存在的水生栖热菌(Thermus aquati-cus)中分离获得,Taq 酶最适活性温度在 70 C～80C,能耐受 PCR 变性过程中的高温,是目前 PCR 扩增反应中经常使用的 DNA 聚合酶。中华人民共和国卫生部2002-04-20批准2002-07-01实施1 WS/T 230—20022.10抑制物/干扰物inhibition/interferenc临床样品中能导致假阳性或假阴性扩增的内源性物质(如血液中的某些成分、痰液中的酸性多糖、尿液、体液等)和外源性物质（如滑石粉、抗凝剂等）。2. 11 dNTP deoxynucleotide triphosphate三磷酸脱氧核苷，包括dATP、dUTP、dCTP、dGTP、dTTP等。在PCR扩增反应中，作为反应底物聚合形成新的 DNA链。2.12热循环仪thermocycler在PCR或其他需要在反应过程中转换温度的体系中用来保证温度准确快速转换的设备。3用途对目前已有稳定、可靠的微生物学和免疫学方法检测的疾病或病原体，不推荐应用PCR进行检测。例如，大多数的细菌感染通过细菌培养3～4天即可报告并明确药敏结果；对甲型肝炎病毒等的感染，通过对其抗原或/和抗体的检测也可明确诊断。对于目前尚无其他实验室诊断技术或现有的诊断技术不成熟、敏感性太低、不能及时准确地反映感染情况的疾病，可推荐应用PCR技术进行检测。如丙型肝炎病毒的感染，