SN_T 1961.11-2013出口食品过敏原成分检测 第11部分：实时荧光PCR方法检测麸质成分.pdf

P中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1961.11--2013出口食品过敏原成分检测第 11部分：实时荧光PCR方法检测麸质成分Detection of allergen components in food for export-Part 11 : Real time PCR method for detecting gluten components2013-03-01发布2013-09-16实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1961.11—2013前言SN/T1961《出口食品过敏原成分检测》共分为19部分：第1部分：酶联免疫法检测花生成分；第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分；第3部分：酶联免疫吸附法检测养麦蛋白成分；第4部分：实时荧光PCR方法检测腰果成分；第5部分：实时荧光PCR方法检测开心果成分；第6部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分；第7部分：实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分；第8部分：实时荧光PCR方法检测榛果成分；第9部分：实时荧光PCR方法检测杏仁成分；第10部分：实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分；，第11部分：实时荧光PCR方法检测麸质成分；第12部分：实时荧光PCR方法检测芝麻成分；第13部分：实时荧光PCR方法检测小麦成分；第14部分：实时荧光PCR方法检测鱼成分；第15部分：实时荧光PCR方法检测芹菜成分；第16部分：实时荧光PCR方法检测芥末成分；第17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分；第18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分；“-第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分。本部分为SN/T1961的第11部分。本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、宝生物工程(大连)有限公司、深圳大学。本部分主要起草人：曹际娟、郑秋月、蒋丹、李晶泉、陈颖、赵昕、王秋艳、徐杨、徐宝梁、刘志刚、刘晓宇、吴海强。 SN/T 1961.11--2013出口食品过敏原成分检测第11部分：实时荧光PCR方法检测麸质成分1 范围SN/T1961的本部分规定了食品中过撤原麸质（大麦、小麦、燕麦、黑麦）成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原数质(←大麦~小麦、燕麦、黑麦)成分的定性检测本部分所规定方法的最低检出限（LOD)为0.01%（质量分数）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1过敏原allergen又称致敏原或变应原，是指能够动起变态反应的抗原，3.2麸质gluten是小麦（Wheat）、大麦（Barley）、黑麦（Rye)燕麦（Oat)等谷物中的一系列单一蛋白质的混合物，是主要的致敏成分。3.3实时荧光 PCR real time PCR在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。3. 4直 cycle thresholdCt 值每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。4方法提要样品经研磨后，提取DNA，以DNA为模板，采用麸质中大麦管家基因（Hordein）、小麦管家基因（Gliadin）、黑麦管家基因（Secl）、燕麦管家基因（Avenin）的特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR1 SN/T 1961.11-2013扩增，根据Ct值，判断样品中是否存在过敏原麸质成分。5试剂和材料除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。5.1检测用引物（对)序列和探针麸质成分扩增引物和探针、内参照（真核生物成分)引物和探针详见表1。表 1试验用引物和探针名称序列(5-3)目的基因TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA内参照5端引物AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT内参照3端引物真核生物18SrRNA基因FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAAC内参照探针C-TAMRA大麦5端引物AACAGCTAAACCCATGCAAGGTA大麦3端引物GTTCGGGGATTTGGGGTAGTTG大麦 Hordein 基因大麦探针FAM-TCCTCCAGCAGCAGTGCAGCCCT-TAMRA CCCAAAG