SN_T 2552.13-2010乳及乳制品卫生微生物学检验方法 第13部分：假单孢菌属的分离与计数.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2552.13—2010乳及乳制品卫生微生物学检验方法第13部分：假单孢菌属的分离与计数Microbiological examination for milk and milk products hygiene-Part 13 : Isolation and enumeration of Pseudomonas spp.2010-05-27发布2010~12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T2552.13—2010前．言SN/T2552《乳及乳制品卫生微生物学检验方法》分为十三个部分：第1部分：取样指南；第2部分：检验样品的制备与稀释；第3部分：酵母、霉菌菌落计数；第4部分：嗜冷菌微生物菌落计数；第5部分：沙门氏菌检验；第6部分：柠檬酸杆菌检验；-第7部分：阴沟肠杆菌检验；第8部分：普通变形杆菌和奇异变形杆菌检验；第9部分：克雷伯氏菌检验；第10部分：阪崎肠杆菌检验免疫荧光法；第11部分：蜡样芽孢杆菌的分离与计数；第12部分：单核细胞增生李斯特氏菌检测与计数；第13部分：假单孢菌属的分离与计数。本部分是SN/T2552的第13部分。本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本部分参照了ISO13720：1995《肉及肉制品假单胞菌属计数方法》（Meatandmeatproducts—Enumeration of Pseudomonas spp. )本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国福建出入境检验检疫局。本部分主要起草人：赵贵明、赵勇胜、郑晶、黄晓蓉。 SN/T 2552.13—2010乳及乳制品卫生微生物学检验方法第13部分：假单孢菌属的分离与计数范围1SN/T2552的本部分规定了乳及乳制品中假单孢菌属的分离与计数方法。本部分适用于乳及乳制品中假单孢菌属的分离与计数。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T2552.1乳及乳制品卫生微生物学检验方法：第1部分：取样指南SN/T2552.2乳及乳制品卫生微生物学检验方法．第.2部分：检验样品的制备与稀释3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。假单孢菌属Pseudomonas spp.按照该项标准操作、25℃培养，在CFC琼脂上形成菌落的一类菌。4.原理4.1样品处理如果样品为液体，平行接种一定数量试验样品于固体选择性平板；如果样品为固体，则首先将样品制成悬液，接种样品后于25℃下需氧培养48h。4.2假单孢菌属数量计算从平板上挑取菌落经氧化酶试验和克氏双糖铁试验确证后，计算获得每毫升、每克样品中假单孢菌属数量。5设备和材料5.1水浴箱：水温45.5℃±0.2℃。5.2温度计：量程1℃~55℃，分刻度0.1℃。5.3培养箱：35℃～37℃和24℃～26℃。5.4吸管：1mL、5mL和10mL，分刻度0.1mL。5.5“L型玻璃涂布棒：直径3mm～4mm，可涂布45mm~55mm的区域。5.6接种环：3mm直径。5.7天平：量程2kg，灵敏度0.1g。 SN/T 2552.13—-20105.8灭菌样品处理器具：取样勺、剪刀、开罐器。5.9样品稀释瓶：100mL、125mL、160mL、250mL和2L样品稀释瓶。5.1015mm×150mm灭菌平皿。5. 11假单孢菌属标准质控菌株：铜绿假单孢菌，ATCC10145；荧光假单孢菌，ATCC13525。6培养基和试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯，试验用水应为蒸馏水。6.1CFC琼脂：见附录A第A.1章。6.2营养琼脂(NA)：见附录A第A.2章。6.3克氏双糖铁：见附录A第A.3章。6.4氧化酶试剂：见附录A第A.4章，6.5API20NE生化鉴定试剂盒或类似产品。注：API20NE是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这信息是为了方便本部分的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。7假单孢菌属检验方法7. 1方法提要乳及乳制品中假单孢菌是通过选择性分离、生化鉴定等方法对乳及乳制品中可能存在的假单孢菌进行定性和定量的检验7.2检验程序假单孢菌属检验程序见图1样品25g(25mL）225mL灭菌生理盐水(DW)*90mL灭菌生理盐水(DW)→0.1mL接种CFC平板25℃±1℃48 h挑选可疑菌落，接种营养琼脂平板25℃±1℃ 24 hAPI20NE或其他生化鉴定系统假单孢菌属认定试验克氏双糖侠试验氧化酶试验菌体形态为杆状，动力阳性，在空气中生长而厌氧条件下不生长，接触酶、氧化酶阳性分解葡