QB_T 4617-2013化妆品中黄芩苷的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 71.100.70QB分类号：Y42备案号：43649-2013中华人民共和国轻工行业标准QB/T4617-2013化妆品中黄芩苷的测定高效液相色谱法Determination of baicalin in cosmetics -High performance liquid chromatography2014-07-01实施2013-12-31发布发布中华人民共和国工业和信息化部 QB/T4617-2013前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由中国轻工业联合会提出。本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口。本标准起草单位：上海市质量监督检验技术研究院。本标准主要起草人：周泽琳、杨轶眉、顾宇翔、冯俊、王庆贺。1 QB/T4617-2013化妆品中黄芩苷的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了用高效液相色谱法测定化妆品中黄芩苷的含量。本标准适用于水剂、乳剂化妆品中黄芩苷的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法3原理试样经75%乙醇涡旋振荡、超声提取、离心沉淀、分离过滤、固相萃取（可选）去除杂质后，采用反相高效液相色谱分离，二极管阵列检测器检测，外标法定量。4试剂和材料除非另有规定，所用试剂均为分析纯。水为符合GB/T6682一2008规定的二级水。4.1乙腈（色谱纯）。4.2乙醇。4.3体积分数为75%的乙醇溶液。4.4磷酸。4.5体积分数为0.1%的磷酸溶液。4.6甲醇。4.7甲酸。4.8黄芩苷：含量不小于95%，CAS号、分子式、相对分子质量和结构式参见附录A表A.1。4.9黄芩苷标准储备溶液：准确称取黄芩苷0.0500g于250mL的棕色容量瓶中，用75%乙醇溶液（4.3）溶解并定容至刻度。此溶液1mL相当于0.200mg黄苓苷。该溶液棕色瓶于4℃冰箱避光可保存7天。4.10黄苓苷标准工作溶液：分别吸取0.2mg/mL黄苓苷标准储备溶液0.00mL、0.50mL、5.00mL、10.00mL于100mL棕色容量瓶中，吸取0.2mg/mL黄苓苷标准储备溶液2.00mL、5.00mL于10mL棕色容量瓶中，再用75%乙醇溶液（4.3）稀释至刻度；配制成浓度为0μg/mL、1μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、100μg/mL标准系列溶液。配制好的黄芩苷溶液应于棕色瓶中避光4℃保存。4.11体积分数为5%的甲酸-甲醇溶液。4.12氢氧化钠。4.13质量分数为1%的氢氧化钠溶液。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪：与二极管阵列检测器联用。5.2分析天平：感量为0.1mg。5.3分析天平：感量为0.01g。5.4棕色容量瓶：10mL、100mL和250mL。5.5具塞离心刻度试管：25mL或50mL。1 QB/T4617—2013超声振荡器5.6走离心机：转速不小于8000r/min。5.7聚偏氟乙烯（PVDF）或混合纤维素膜。滤膜：孔径0.22材质可用聚四氟乙烯（PTFE5.8um5.9涡旋振荡器。5.10）阴离子交换固相萃取小柱氮吹装置。5.11移液管或移液器：2mL和10mL。5.12分析步骤66.1样品处理6.1.1提取分析天平取样品1.00g（精确至0.01串）于具塞离心刻度试管（5.5中，加入75%乙醇溶液（4.3）30℃水浴中超声提取20min，冷却至室温后用75%乙醇溶液（4.3）至近10.0mL，涡旋振荡1min，补足至10.0mL，8000r/min离心分离5min，上清液经0.22um滤膜过滤。（当需要降低检出限或试样中存在对黄苓苷检测有干扰的杂质时使用）6.1.2净化子交换固相萃取小柱（5.10）先用5mL甲醇和5mL水活化，然后取6.1.1步骤中离心后的将阴离-可提高离心速度或用滤膜过滤后再上样）。样品上清液5mL加入上样结束后用5mL甲醇（4.6）洗涤，然后用5%甲酸-甲醇溶液（4.11）5mL洗脱，收集洗脱液氮并流速均应控制吹干，用75%乙醇溶液（4.3）1mL定容并超声助溶，经0.22μm滤膜过滤。上述过程的在1mL/min。6.2测定条件高效液相色谱测定参考条件如下：a）色谱柱规格：C18色谱柱，250mm×4.6mm（内径5μm），或相当者；：0.1%磷酸（4.5）为22：78（体积比）b）流动相：乙腈（4.1c）柱温：30℃d）流动相流1.0mL/mir2e）进样量10μL;f）检测波长：276nm。作曲线绘制6.3标准工按6.2色谱条件检测。以标准系列溶液（0 μg/mL、1 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL