SN 1135.1-2002马铃薯癌肿病检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1135. 1—2002马铃薯癌肿病检疫鉴定方法Methods of quarantine and identification for Synchytriumendobiticum (Schilberszky) Percival2002-08-02 发布2003-01-01 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN /T 1135. 12002前言本标准的附录A、附录 B均为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位，中华人民共和国云南出人境检验检疫局。本标准主要起草人：蒋小龙、沐咏民、寸东义、魏正、白松。本标准系首次发布的检验检疫行业标推。I SN/T 1135. 1—2002马铃薯癌肿病检疫鉴定方法1范围本标准规定了马铃薯癌肿病菌的检疫鉴定方法。本标准适用于马铃薯种薯、食用薯以及夹带士壤中马铃薯癌肿病菌的检疫和鉴定。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2. 1癌肿 wart癌肿病的典型症状，花椰菜形，产生在块茎芽眼部位。初期白浅色，后为深褐色。此外，在芽眼部位还可形成棒状”“掌状”等膨大畸形组织。2. 2泡突 blister产生于休眠芽、幼芽表面。单个透明，隆起小泡，大小为0.5mm左右。2.3莲花座rosette产生于休眠芽、幼芽及癌肿组织表皮。形似莲花，其组织切片呈现为大型薄壁细胞组成的环状组织。其中央含夏孢子（堆)或休眠孢子囊。2.4疮痧 scab在块茎表面产生不规则形或环形(中央凹陷，形似火山口)隆起组织，沿水平扩展。2. 5始细胞protocell被侵染细胞周围的毗邻细胞呈辐射状的增生，中心被侵染细胞内的菌体为始细胞。2.6原孢堆prosorus由始细胞逐渐扩大并充满寄主细胞而成，有孢璧。2.7泡囊vacuole产生于原孢堆外壁上方。原孢堆细胞质和孢核通过外壁小孔排到新薄囊泡内。2. 8夏孢子鑫堆summer sporangiosorus由薄囊泡发育而成。呈卵形、扇平或近球形，薄璧，直径为47μm～72μm×81μm～100μm(有资料报道为 40.3 μm~~77 μmX31.4 μm~64.4 μm)。2. 9瘦孢子囊summer sporangium由夏孢子囊堆的内含物发育成多角形、卵形或近球形。2. 10休眠孢子囊resting sporangium SN/T 1135. 1—2002单个产生于癌组织表层细胞内，卵圆形、长圆形或角形。锈褐色，直径25μm～75 μm。壁厚，分三层，其内壁薄，无色。中壁光滑，金褐色，壁厚。外壁厚薄不均，有皱纹(不规则脊突）。成熟休眠孢子囊内含数百个游动孢子。3原理3.1马铃薯癌肿病菌的分类地位马铃癌肿病菌（Synchytrium endobiotium（Schilberszky）Percival,异名 S. Salani Massee 和Chrysophlyctis endobiotium Schilberszky)属壶菌门(Chytridiomycota)壶菌纲(Chytridiomycetes),壶菌国（Chytridiales），集壶菌科（Synchyrtiaceae），集壶菌属（Synchytrium），内生集壶菌（马铃薯癌肿病菌），可侵染马铃薯薯块，引起癌肿，英文名 Potato wart disease，简称马铃薯癌肿病。3.2检疫原理该病原真菌是典型的土壤习居菌，主要以抗逆性很强的休眠孢子囊在病薯块内和土壤中越冬并长期生存。当温湿度适宜时，休眠孢子囊萌发形成游动孢子，侵人寄主表皮细胞引起膨大，生长成为单核有璧的菌体，进一步发育成原孢堆。本标准根据病原菌的这一特性，首先检查薯块是否有癌肿病变，并将可疑薯块进行切片检查病原菌；其次是收集随马铃薯携带的土壤，检查其中是否有休眠孢子囊并检测其活力。3.3鉴定原理马铃馨癌肿病菌引起的主要症状特征、病原菌在不同浸染时期的繁殖体和形态特征是鉴定该病原菌的依据。4仪器及用具a)体视显微镜；b)荧光显微镜；c）培养Ⅲ:直径4 cm、5cm、6 cm;d)小烧杯:50mL、150mL、250ml;e)样筛：孔径为105μm、74μm、37μm;f)载玻片；g)，盖玻片；h)滴管:2 mL、3 ml;i)移液管：10 mL。5 试剂本标准所用试剂为化学纯。氯化钠(NaCI);a)b)氯化铵(NH,CI);c)硝酸铵(NH,NO）;d7四氯化碳(CCl4);e)2%酸性品红(C20HiO,N;S;Na2);f）1%碱性品红(C2oH2oCINs);0. 1%升汞(HgCl2);g)h)吖啶橙(CH2N,CIZnC12);i)曲拉通 X-100(C34Hs20..)。2 SN/T 1135. 1—20026 现场检疫6.1 直观检查